Введение к работе
Актуальность проблемы исследования. Абсолютное большинство используемых в клинической практике лекарственных препаратов не являются специфичными к "месту" болезни или патологического процесса Обычно, получаемый лекарственный препарат распределяется достаточно равномерно по всему организму, что, в свою очередь, требует повышения дозы препарата для достижения терапевтического эффекта в требуемом органе Увеличение дозы лекарственного вещества часто приводит к возникновению нежелательных побочных эффектов. Самым приемлемым решением этой проблемы является так называемый направленный транспорт лекарств, т е. способность лекарственного вещества селективно накапливаться в органе (клетке)-мишени независимо от пути введения в организм.
Ранее, было показано, что моноклональиые антитела (МоАт) против ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) специфически накапливаются в легких экспериментальных животных после системного введения (Danilov et al , 1988; 1991) Были исследованы фармакокинетические свойства этих антител и показана возможность использования этого феномена для визуализации сосудистого русла легких (Danilov et al., 1989) и для диагностики легочных повреждений (Atochina et al., 1992; Muzykantov et al , 1991)
Серия работ, проведенных В. Музыкантовым в сотрудничестве с нашей лабораторией, показала возможность эффективной доставки в легкие терапевтических ферментов - супероксиддисмутазы, каталазы и активаторов плазминогена, конъюгированных с антителами против АПФ (9В9) (Muzykantov et al, 1994; 1996; Atochina et al , 1998).
Следующим логическим шагом в развитии АГІФ-зависимого направленного транспорта лекарственных веществ к легким должна быть доставка генетического материала, конъюгированного с этим же вектором (МоАт против АПФ). Учитывая, что наиболее эффективными векторами для генной экспреспи являются вирусы, естественным было бы получение специфического конъюгата антител 9В9 с вирусным вектором, позволяющим эффективно доставлять генетический материал к клеткам-мишеням (в данном случае к эндотелию легких)
Цель и задачи исследования Основной задачей данного исследования является получение модификаций моноклональных антител 9В9 и использование полученных модификаций и конъюгатов для направленного транспорта лекарств и генетического материала к эндотелию легких. Выполнение этой работы связано с решением следующих задач:
1 Определение оптимальных условий модифицирования
(конъюгирования) моноклональных антител против анпютензин-
преврашдющего фермента и определение фармакокинетики
полученных модификаций.
2. Сравнение антител к разным эндотелиальным антигенам с целью
получения наиболее селективного вектора для направленного
транспорта веществ к легочному эндотелию.
3 Создание клеточной модели АПФ-зависимого направленного
транспорта веществ к эндотелию легких in vitro.
4. Изучение возможности доставки генетического материала к эндотелию
легких с помощью аденовируса, конъюгированного с антителами 9В9. Новизна результатов В результате данной работы получены конъюгаты моноклональных антител-векторов для направленного транспорта лекарств к легочному эндотелию и показана реальная возможность перенаправления аденовирусных векторов и селективной экспрессии генного материала в органе-мишени (легком) in vivo.
Практическая ценность работы Полученные результаты позволяют предложить использование конъюгатов антител против АПФ (9В9) в клинической практике для доставки генетического материала к легочному эндотелию с целью лечения гипертонии легочного генеза, опухолей легких и метастазов.
Апробация работы Результаты работы были представлены на Международных конгрессах ATS/ALA (American Thoracic Society/American Lung Association) в 1994 (Boston, USA), 1998 (Chicago, USA) и 1999 (San-Diego, USA) гг, на конгрессе Генной терапии ВІ999 г (Washington, USA). Публикации По материалам диссертации опубликовано 6 статей и 8 тезисных сообщений
Структура и объем работы Дисертация состоит из разделов Введение, Обзор литературы. Результаты и обсуждение, Выводы и список литературы. Работа