Введение к работе
Актуальность проблемы. Семейная гиперхолеотерянеыия /СГ/ -
моногенное заболевание человека с аутосомно-догтанантнкм типом
наследования. СГ фенотипически вь.івляется у больных как тяже
лая форма гиперлипопротеинемии тппа Па. При гетерозиготной фо
рме СГ происходит повышение уровня холестерина-в крови-до 600-
600 іяг/іпо мл; "при гомозиготной форме это повышение еще более
значительно - до 600 - 1200 мг/100 мл. У больных часто наблю
даются ксан.эмы на сухожилиях, липоиднне дуги роговицы. Одна
ко, наиболее тяжелым проявлением СГ является развитие коронар
ной недостаточности в относительно раннем возрасте. Итемичес-
кая болезнь сердца развивается у гетере игот поСГ в возрасте
до 40 лет, гомозиготы поСГ часто погибают от инфаркта миокарт
да, не достигая возраста 20 лет / Goldstein,,. Brown, І9ЯЯ/гГе-
- терозиготная гГорма СГ в большинстве популяций людей белой 'жсы
встречается с частотой 1:50.0, более тяжелая гомозиготная форма
СГ наблюдается у одного человека на шллион новорожденных. До
минантный тип наследования СТ делает ее одним из самых широко
распространенных генетических заболеваний человека /Goldstein,
Brown, 1989/. '. .
Причиной данного заболевания является снижение скорости катаболизма липопротеинов низкой плотности /ЛНТ7/ вследствие количественной «едсотнточности или дисфункции-их-специфического рецептора /РЛНП/ / Browa, Gcrldrteln, 1986/, В 1984 г была охарактеризована мРНК / Yamamafro et. al., 1984/, а в І9Й5 г был клонирован хромосомный ген рецептора MI /.. SUdtaT.etаї»,І9Я5/ что повлекло за" собой лавинообразное увеличение .числа работ , посвященных характеристике полиморфизма гена РЛНП ичприродных мутаций в этом локусе. Так, на I апреля 1990 г было охарактеризовано 42 различных мутантных аляеля РЛНП, что позволило понять механизмы функционирования РЛНП / ВаЬЬа. at-al., І990Д Число новых идентифицированных генетических дефектов РЛНП продолжает расти. С накоплешіем (Іактического материала появилась... возмсетость проведения прямой "и коовённой, основанной на изучении сегрегации ассоциированных с геном РЛНП полиморфизмов длин рестрикционных фрагментов /ПДРФ/, ДНК-диагностики СГ. Она в настоящее время проводится в ряде высокоразвитых стран /США,
Канаде, Великобритании, Финляндии, ЮАР и др./.
Классическим методом диагностики СГ является определение способности фибробластов больного в культуре клеток связывать к кЕтаболизировать Л*Ш /G&iaeteia et al., 1983/. Однако , вследсті-ле дороговизны .подобных исследований они мог;'" производиться лишь в небольшом числе высокоспециализированннх центров /Samakawa. et al.t 1Ч8$/, таких как КНЦ РАМН в Москве. Вместе с т-ем, катода ДНК-дкагностика :*меют свои ..реимущества.. перед названным методом. Окй нз требуют взятия биопсии фибробластов кожи больного, а могут производиться на материале, получаемом из лейкоцитов. Кроме того, методы ДНК-диагностики характеризуются большой скоростью и надежностью получаемых результатов; при необходимости, как при подозрении на гомозиготную <*орму СГ, он" могут производиться пренатально.
На территории бывшего СССР работ по ДНК-диагностике СГ не производилось.
Цель исследования. Целью настоящего исследования явля-лооь изучение молекулярных основ СГ в Российской популяции и разработка методов прямой и косвенной ДНК-диагностики СГ.
Задачи исследования. В задачи исследования входило:
получить ДНК-зонда на различные стменты гена РЛНП;
изучить Санкт-Петербургскую популяцию больных с типом Па гиперлипопротеинемии на наличие геномных перестроек в локуое РЛЖ, выявляемых с помощью .гибридизации по Сауэетату;
оценить частоты встречаемости редких аллелей ПДРф, выявляемых с помощью ре^триктаз v&q І,. Ва*ЕІІ„ Pwb іі и иео і, и сравнить их с таковыми, описанными для друг*х популяций Европы и Северное Америки;
изучить сцеїґлзкие ПДРФ гена РЛНП с гиперлипог іотеинемией типа Па с целью диагностики СГ.
Научная новизна работы. Научная новизна работы определяйся тем обстоятельством, что впервые в популяции кителей СНГ r-.именены метода, ДНК-диагност хи в генетическом анализе ПГ. Описана неизвестная из,литературы делеция, элиминируют экэоны 4-6 ~ена РЛНП. Впервые показана лолекуллрнач гетерогенность СГ в популяции кителей Санкт-Петербурга и испо.гьэо вак анализ н.^ледованкя ПДРФ, ассоцлированкых с геном РЛНП
для генетического консультирования в семьях с СТ.
Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретический интерес представляет то.обстоятельство, что СГ в популяции жителей Санкт-Петербурга ягляется гетерогенным заболеванием, а также описание новой мутации в локуе РЛНЛ, которая, как было показано, ведет к развитию заболевания в двух поколениях. Практическая ценность работы определяется тем, что полученные при анализе наследования ІЩРФ і отдельных семьях данные непосредственно применимы для генетического консультирования. Так, в ходе анализа для четырех детей был установлен диагноз СГ, для четырех - отвергнут.
Положения, выносимые на защиту.
-
ПГ в популяции .жителей Санкт-Петербурга - гетерогенное по своей молекулярной природе заболевание. По меньшей мере четыге типа мутаций ведут к развитии фенотипа СТ..в.исследованной популяции.
-
В семье больной А.Д. заболевание вызвано пр.гяженной деле-цией размером 5 т.п.н., элиминирующей экзоны 4-6 гена РЛЩІ.
і". В двух семьях к развитию фенотипа СГ ведут точковие мутации; заболевание в какдой из семей сегрегирует с определенными гап-лотипами ПДРФ гена РЛНЛ, что позволяет пост лить или отвергнуть диагноз.СГ у детей пробанда.
4. Частоты встреча ' гости редкогб аллеля ПДРФ для рестриктаэ '
Saq і,. Bfltiaii,.,Лео-і. в-популяции жителей Санкт-Петербурга не
отличаются значимо от.частот, наблюдаемых у лвдей белой расы
Европы и Северной Америки. Частота редкого аллеля Рта и ПДРФ
в популяции жителей Санкт-Петербурга сушественна ниже /на уро
вне значимости 0,01/ частоты этого аллеля в итальянской попу
ляции. . '
Апробация работы. Работа докладывалась на Всесоюзных конференциях "Биохимия - медицине" /29 ноября - Т декабря 1ЭДЯ г, г. Ленинград/ и "Современныенаправления создания, медициноких диагностикумов" /I3-T4 декабря "[ЭД8 г, г. Москва/; на Всесоюзной школе-семинаре "Молекулярная биология и медицина" /I2-IB мая 1990 г, г. Ленинград/. Тезиск работы были опубликованы в Трудах Второго Всесоюзного съезда медицинских генетиков /4-6 декабря 1990 г, г. АлмаЦтаЛ работа также была представлена в
виде стендового сообщения на I и П Всесоюзных конференциях по генотерапии /Киев, июнь 1989т и июнь 1990 г/.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 105 страницах машинописною текста и включает раздели: "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты", "Обсуждение результатов" и "Выводы". Диссертация содержит 27 р;:сунког и 8 таблиц,- Список литературы включает ЦЗ источников, из них 6 работ принадленат отечественным авторам и 107 - зарубежным.