Введение к работе
Актуальность теми исследования. Высокая эффективность и избирательность действия ферментных препаратов обусловили их появление в химической технологии и пищевой промышленности, аналитических процедурах и медицине. Актуальность медицинского использования ферментов связана как с созданием лекарственных средств, имплантантов и диагноегтаумов. так и с разработкой принципиально новых методов коррекции нарушений метаболизма и способов'их выявления. Широкое применение ферментов в медицине сдерживается, в первую очередь, их малой доступностьо и дороговизной их чистых препаратов. Эффективность реального медицинского использования ферментов определяется величиной их стабильности. Одним из способов получения стабилизированных водорастворимых форм ферментных препаратов является химическая модификация.
Актуальность темы работы определяется практической необходимость» .использовать стабилизированные производные ферментов для их реального применения в качестве лекарственных средств, а также отсутствием в настоянеє время эффективных средств для терапии довольно широко распространенного профессионального заболевания легких - силикоза. Силикоз развивается при попадании в легкие человека промышленных кварцеодерхаших аэрозолей. При этом в легких активизируется свободкорадикальные процессы и увеличивается синтез соединительнотканных белков. В патологических условиях фиброза легких эндогенных феркэнтов антиоксидантної запиты (суперок-сиддисмутазы (СОД) и каталззы <КАТ)] может оказаться недостаточным для эффективного удаления 0^ и !1202. поэтому представляется целесообразным использовать экзогенные СОД и EAT для терапии силикоза. С цель» ловиаения возможного фармакологического воздействия іш использовали СОД и КАТ в стабилизированном виде. Таким образом, получение стабилизированных ферментных препаратов., сравнительное изучение эффективности их действия на модели экспериментального силикоза является весьма актуальным для разработки действеяюх лекарственных средств и новых курсов терапии легочных поражение. Цели и задачи исследования. Задачи настоящей работы
СОСТОЯЛИ В : .
(1)-исследовании химической модификации супероксиддисмутазы (СОД) и катавазы (КАТ) :
и каталазы (КАТ)
(г) изучении сравнительных фармакокинетическнх свойств Ферментных
препаратов :
(3) апробации : действия ферментних препаратов на модели
экспериментального силикоза у крыс :
(4) определении роли дополнительного эффекта КАТ к действии СОД
при терапии фиброза легких : \
(5) обосновании вознохности использование комбинированных
ферментных препаратов для терапии легких (в форме
составов/композиций или ковалентних коньюгатов).
Целью данного диссертационного изучения явилась экспериментальная
разработка ыодифипированных производных супероксиддисыутазы и
каталазы для антиоксидантної] терапии легких при силикозе и
апробация подходов для их применения при экспериментальной
лечении. ""
Научная новизна работы.
і. В настоящей работе подобраны оптимальные условия получения новых ферментных средств на основе супероксиддисыутазы и каталазы. модифицированных альдегиддекстраном, проведено сравнительное изучение свойств натавных и модифицированных ферментов, отмечена повыэенная термостабильность последних в результате модификации.
-
Впервые получен и охарактеризован биферментный ковалентний конъюгат КАТ-АД-СОД. сохраняющий обе специфические каталитические активности в системах in vitro в in vivo.
-
В работе впервые применены кодифицированные ферменты СОД и КАТ для терапии силикоза, используя различные способы их введения.
-
На «одела экспериментального силіікоза показан дополнительный терапевтический эффехт каталазы к действию супероксиддиснутазы. Оценена эффективность антифиброзного действуй каждого из препаратов (СОД-АД. КАТ-АД. КАТ-АД-СОД. СОД-АД+КАТ-АД. СОЛ+КАТ. СОД, КАТ) при экспериментальном силикозе.
Практическая ценность работы.
і. В работе экспериментально обоснована целесообразность применения модифицированной СОД для терапии силикоза, г. На модели экспериментального силикоза продемонстрирован дополнительный защитный эффект каталазы к действию СОД.
з. Указан подход для проведения комбинированной гнзимотерапии этого заболевания с использованием ферментных композиций, обладающих различными видами ферментативной активности : СОЛ (оксидоредуктаза) '-/ антиоксидантноп и гиалуронвдаза (ГУ), гидролаза - деполимериэующей.
АПЕоЗащщ. работы. Результаты исследования были представлены ! на . VIII и X Всесоюзных семинарах "Кислородные радикала в химии, биологии и медицине" {Минск, 1990 г. Иарочь. гэзгг.): на vu Всесоюзном симпозиуме "Иняенерная энзимология" (Москва. 1991 г.): на ill Всесоюзной конференции "Современное состояние и перспективы развито? фармакохинетики" (Москва. 1991 г.); на XI конференции
"Enzyme Engineering" (Hawaii. USA, 1991 Г.): на конференции "Asia-Pecific Biochemical Engineering Conference" (Yokohama.
Japan. 1992); на иехлабораторном семинаре КНЦ РАМН (Москва. 1993
г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано ю работ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора