Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Развитее современной медицины требует разработки методов направленного транспорта лекарстзенних веществ. Один кз ключєеьіх аспектов этой проблемы - целевая доставка биологически-активных вещестз з клетку. Поскольку, большинство макромолекул и гидрофильных низкоиолекулярных веществ поглощенных клеткой в процессе зндоцитоза не способно преодолевать меибра-лшя барьер и проникать в цитоплазму, где обычно реализуется их биологический зффект, эти методы ДОЛЖНЫ обеспечивать эффективный транскембранный перенос везестз. Применение большинства нетодоз введения белкоз в клетку ограничено узкими областями исследовании и, эти методы ке могут быть адаптнрсзаны для транспорта зевэстз з организме.
3 качестве одного из подходоз для решения этой проблемы кедазно был пргдло.-еі: метод искусственное гидрофобизации белкоз путем их аиилкрования остатками хирных кислот. Подобная модификация ведет к усилению мэмбранноЯ активности белка, и, з частности, обеспечивает его транслокацию через модельные лп-пидкые мембраны. Введение в молекулу белка нескольких хирно-кислотных остатков значительно увеличивает антппролиферативный зффект токсинов; и усиливает подавление репродукции вирусов в клетках специфическими антителами. Кроме того, з экспериментах in vivo гидрофобизация придает Fab-фрагсіентам антител способность проникать через гематоэнцефалический барьер в мозг. В то ж.е время механизмы усиления биологической активности и транспорта гидрофобизозанных белков в клетку до настоящего времени остаются неизученными.
Помимо этого представляется целесообразным, изучение транспорта белков, модифицированных амфифильными молекулами полимерных ПАВ, в частности блоксополимеракн поли(оксиэти-лена)-поли(оксипропилена) - плюрониками. Подобные ПАВ, благодаря своей низкой токсичности и часто низкой иммуногенности находят широкое применение в рецептурах искусственной крови. Благодаря своєї амфнфнльной природе, плпроники растворяются, как з органической, так и з водной средах. Кроме того, известно, что' полиоксизтилены способны инпуцирозать процесс слияния мембран. Поэтому, есть основания предполагать, что конъюгация с плароником существенно изменит мембранную актизнссть модифицируемого белка.
ОСНОВНАЯ ЦЕЛЬ РАБОТУ заключалась з . исследовании механизмов транспорта в клетку белков модифицированных остатками жирных кислот и полимерными ПАВ (плароникамк).
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. В работе изучены закономерности транспорта белков кодифицированных остатками жирных кислот и молекулами плюрониха Р85. Установлено, что транспорт в клетку белков, модифицированных остатками жирных- кислот протекает ьо зндоцитозному механизму и не сопровождается транелокациек в цитоплазму. Показано, что гидрофобизацкя белка усиливает его связывание и эндоцитоз клеткой. На примере с^-интерферона продемонстрировано усиление биологической активности г результате введения остатка стеариновой кислоты за счет усиления специфического связывания с рецептором.
На примере пероксидазы, модифицированной ллхроникоы PS5 показана возможность придаю:я белку способности проникать з цитоплазму клетки. Продемонстрирована возможность транспорта в цитозоль кизкомолекулярных веществ путем - встраивания их в мицеллы полимерного ПАВ. Показана возможность усиления транспорта в клетку вещестБ, солюбилизировакных в мицеллах плюроника за счет встраивания лиганда, способного взаимодействовать с клеточным рецептором.
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ. Предложенный в работе метод транспорта з клетку веществ, ассоциированных ' с мшеллок полимерного ПАВ позволяет использовать данный подход для создания систем направленного транспорта фкзиологичеекп-ак-тизнкх веществ.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты были доложены и обсуждены на международных конференциях: 1-ом Совместно!.; севзт-ско-япоиско-китайском симпозиуме. "Успехи химик полимеров", Москва (1991), 2-ой Советско-итальянской конференции по полимерам, Ленинград (1991), 2-ой конференции Института хизлп "Биомедицинская стратегия против СПИДа", Кране Монтана, Швейцария (1991), 2-оя конференции ЮНЕСКО "Иилунология, вирусология и общество", Киев (1991).
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа
изложена на страницах машинописного текста к гкличаэт А
таблицы и 16 рисунков.