Введение к работе
Актуальность проблемы. Природный фосфолипид
лизофосфатидилхолин (ЛФХ), как было установлено в последние годы, является важным медиатором атерогенных эффектов окисленных липопротеидов низкой плотности (Witztum et al., 1997, Steinberg et al., 1989, Pech-Fvsellemetal., 1996) . Этот лизофосфолипид составляет до 40% суммарных липидов окисленных липопротеинов и его содержание повышается в атеросклеротических поражениях сосудов человека и экспериментальных животных, содержащихся на атсросклеротической диете [Langton et al., 1992, Mock et al., 1990]. В экспериментах in vitro были установлены его множественные атерогенные эффекты. ЛФХ оказывал митогенный эффект на макрофаги мышей и, как предполагают, играл критическую роль в формировании пенистых клеток при взаимодействии макрофагов с окисленными липопротеидами[8акаі et al., 1994]. ЛФХ индуцировал экспрессию генов ростовых факторов, вовлеченных в атерогенез и воспалительные процессы, в эндотелиальных клетках [Kita et al., 1997, Zhu ey al., 1997, Chai et al., 1996]. Он мог регулировать экспрессию на поверхности эндотелиальных клеток молекул адгезии, ответственных за хемотаксис мононуклеарных лимфоцитов в артериальную интиму [Kume et al., 1992]. ЛФХ также проявлял вазоактивные свойства, модулируя эндотелий- зависимую артериальную релаксацию и нарушая эндотелий-регулируемый вазомоторный контроль [Kugiyama et al., 1990, Murohara et al., 1994, Freeman et al., 1996]. Этот фосфолипид мог влиять на агрегацию тромбоцитов.
Все найденные свойства ЛФХ, по-видимому, должны иметь сходный механизм. Мембрано-модулирующие свойства ЛФХ известны довно [Weltzien, 1979]. При концентрациях около 100 мкМ он оказывает цитолитический эффект, проявляя детергентные свойства В то же время в концентрациях 1-10 мкМ ЛФХ способен проявлять специфическое
воздействие на многие процессы с выраженной гормональной регуляцией; описанные выше.
ЛФХ образуется в клетках при активации цитозольной гормонрегулируемой фосфолипазы А2 наряду со свободными жирными кислотами [Ansell, 1982]. В то время как последние являются потенциальными вторичными посредниками и предшественниками эикозаноидов, роль ЛФХ в клеточной физиологии остается неясной. В работах последних лет авторы все чаще рискуют присоединить ЛФХ к числу липидных вторичных посредников в передаче внутриклеточных сигналов через активацию клеточной фосфолипазы Аг [Yuan et al., 1996, Flavahan et al., 1993, Kugiyama et al., 1992]/
Недавно было установлено, что с ЛНП также связана одна из форм фосфолипазы Аг, которая, как полагают, несет протективную функцию -расщепляет фосфолипиды с окисленными жирными кислотами. Благодаря ее активности в окисленных ЛНП снижается концентрация перекисных соединений и уменьшается цитолитический эффект [Tew et al., 1996].
Таким образом, в настоящее время можно поставить два основных вопроса в изучении физиологической и патофизиологической роли ЛФХ. Первый - это выяснение механизма действия низких концентраций ЛФХ на клетки, и второй - атерогешгую ли роль играет ЛФХ при накоплении в ЛНП. Целью настоящего исследования было выяснения закономерностей действия ЛФХ в свободном виде и в составе ЛНП на рецептор-зависимые процессы на тромбоцитах и мембранах сердца. В работе были поставлены следующие экспериментальные задачи:
1. Изучить влияние ЛФХ на начальный этап холинергической
передачи сигнала - связывание мускаршювого антагониста
хинуклидинилбензилата с мускариновым холинорецептором мембран
предсердия кролика.
2. Изучить влияние ЛФХ на активацию и агрегацию тромбоцитов
под влиянием АДФ, тромбина и ФАТ.
.ї
3. Выяснить влияние накопления ЛФХ в ЛНП на иммунореактнвность апо-В и связывание с ЛНП-рецептором.
Научная новизна н практическая значимость работы. Впервые проведено изучение функции и влияния ЛФХ на пути передачи сигналов в тромбоцитах, в которых идет его активное образование. Детально изучено влияние ЛФХ на системы обмена кальция в тромбоцитах. Применен достаточно надежный прием исследования влияния ЛФХ на агонисты различного механизма действия, что позволяет с достаточной степенью уверенности отнести эффект ЛФХ к влиянию на рецсптор-О-белковый комплекс тромбоцитов. Кроме того, показано, что подобным эффектом обладают ЛНП, у которых, по сравнению с нормой, содержание ЛФХ повышено на порядок. Исследование механизмов холинолитического действия ЛФХ показало, что и в этом случае эффект проявляется на стадии образования активного рецептор-О-белкового комплекса. Это явление представляет собой интерес, так как может лежать в основе хорошо известного, но пока не объясненного феномена - нарушения эндотелий-зависимого расслабления коронарных сосудов при гиперхолестеринемии.
Апробация работы. Результаты работы были представлены на симпозиуме "Липопротеиды и атеросклероз" (Санкт-Петербург, 1995) и на межлабораторном семинаре ИЭК РКНПК МЗ РФ (Москва, 1998).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов и материалов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов и списка