Введение к работе
Актуальность пройдеш. Нарушение эндогенной регуляции активности На-насоса клетки является важнейшим патофизиологическим звеном в развитии ряда заболеваний и неотлошшх состояний. Это касается, например, эссенпиальной гипертонии и гипертонии беременных (Нашіуп J.U. et al. , 1982; Kelly R.A. et al. , 1985 и др.), наследственной формы артериальной гипертонии(Ро-гаева Е.А., 1988). уремии ( Welt L.G. et al. I964;Bourgolignie J.J. et al- , 1974) и других патологических состояний.
Более ТОГО, ПО мнению НаЪег Е., Haupert G.T. Jr,COTHTH В РЗГУЛЯ-
ции Na, К-АТОазы играют существенную роль, возможно, в преобладающем большинстве болезней человека.
В связи с этим усилия многих исследователей были направлены на изучение проблемы функционирования и эндогенной регуляции Na-насоса клетки. Особый интерес представили данные de .Vardener et al.(I96I), впервые высказавших предположение о существовании эндогенных веществ, циркулирующих в крови и оказывающих существенное влияние на активность ка. К-АТФазы плазматических мембран клеток. В дальнейшем подобные соединения были обнаружены и в других тканях и биологических жидкостях.
Проблема изоляции и идентификации эндогенных ингибиторов Na, К-А1Фазы привлекла пристальное внимание широкого круга ученых, поскольку ее решение открывает перспективы для терапии заболеваний и неотложных состояний, сачзанных о нарушенной регуляцией активности Да-насоса клеточных мембран.
Некоторые из этих ингибиторов к настоящему времени получены в высокоочищенном состоянии, изучены их физико-химические и биологические свойстза ( Clarcson Е.ы. et al.,1979; Akaga*a к. et al., 1984; Haupert G.T.Jr. et al. ,1984; Licbtstein D.et al.. 1985; Cloix J.-F. et al., 1985; Halperin J. et al., 1988). Однако в доступной литературе нами на обнаружено сведений о выделении в индивидуальном состоянии эндогенного ингибитора на, К-АКазы из мозга млекопитающих. Мы не нашли также работ, посвященных детальному анализу кинетики реакции гидролиза АТ$, катализируемой Ш, К-АТФазой и ингибируемой данным соединением из мозга. В связи с этим целью настоящей работы явилось выделение эндогенного ингибитора Na, К-насоса клетки из мозга крыс и его идентификация. Выбор ткани головного мозга в качестве источника для выделения ингибиторной субстанции продиктован тем,
ЧТО ЫеСТО ЄГО ПРОДУКЦИИ. ПО МНеНИЮ бОЛЬШИНСТВа аВТОРОВ (Alagh-
band-Zadeh J., 1983; Haupert G.T.,Jr. et al., 1984; Carilli C.T. et al., 1985; Morgan K. et al., 1985), вероятнее всего, находится в мозге.
В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:
-
выделение из мозга крыс ингибитора Na, К-АТФазы в индивидуальном, химически чистом состоянии;
-
разработка оптимального способа получения ингибитора из мозга в препаративных количествах;
-
изучение возможного механизма ингибирования На, К-насо-са клетки выделенным веществом.
Надчная_новизна_2аботы состоит в том, что впервые в индивидуальном состоянии из мозга крыс выделен ингибитор Na, К-АТФ-азы нервных клеток, даны его химическая, кинетическая характеристика и вероятный механизм действия. Выделение эндогенного ингибитора трансмембранного транспорта N а+ и К+ и его многосторонняя характеристика дополняют и расширяют представления о механизме эндогенной регуляции этого фермента, направленной на поддержание его активности на функционально обусловленном уровне.
Нау^о-практическад_значимость исследования заключается в том, что отработан оптимальный способ получения ингибитора На, К-АТФазы из мозга крыс в препаративных количествах. В перспективе это соединение может быть использовано для патогенетически обоснованного подхода к терапии ряда заболеваний, в основа которых лежит дисфункция На-насоса клетки.
На_защиту_выносятся_сле ДУ^Ще_положе ния:
-
разработанный способ выделения из мозга крыс химически чистого эндогенного ингибитора ill а, К-АТФазы нервных клеток;
-
кинетические аспекты ингибирования На, К-АТФазной реакции фактором, выделенным из мозга крыс;
-
дозозависимый эффект выделенного фактора на активность На, К-АТФазы макросом мозга.
Апробация_работы. Материалы работы доложены на 57-ой итоговой молодежной научной конференции Башкирского государственного медицинского института (Уфа, 1992); на совместном заседании кафедры биохимии ШЛИ, кафедры фармакологии № І БГМИ, Уфимского отделения Российского биохимического общества и лаборато-
рий биотехнологии и физиологически активных веществ Отдела биохимии и цитохимии ЕНЦ РАН (Уфа, 1992).
Публикации. По тема диссертации опубликовано 3 научные работы.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на /// страницах машинописного текста, содержит 19 рисунков.. 6 таблиц. Состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной, части, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, содержащего 29 отечественных и 179 иностранных источников.