Введение к работе
Актуальность проблема. Е настоящее время экэогеияиэ гистони известии как антимикробный и антивирусные агенты, а также гак факторы, повыиавдке неспещіфическуп резистентность организма, благодаря способности опсоаизировать бактерии и стимулировать фагоцитарную и бактерицидную активность макрофагоз ( Лшмаршг ЯП. и др., 1972 ; Горюхина о,А., Титана Т.Е., 1984 ).
Как потенциальные хечебкиэ средства, пістони привлекают внимание исследователей, благодаря тому, что они обладают низкой токсичностью, незначительной антигеняоетыо. способностью проходить чераз биологические мембрана и павьгаать их проницаемость для других веществ. Возможность использования гистонов в качестве агентов, повышают* проницаемость клеточных мембран для антибиотиков, уже нашла свое подтверждение : в эксперименте обосновано применение гистонов как средства, потенциругагэго гтотивоту-баркулезное действие изониазида (Аамарш И.IL и др., 1631).
Особенно перспективным представляется использование гистонов для переноса фармакологических агентов,- слабо проникающих черев тканевые барьеры,в тшеой важный орган, как головной мозг.
Поступление лекарств к нейропептидов в мозг ограничивается гематоэнцефалическим барьером - сарьером между нервными клетками и элементами микроциркулярного русла. Капилляры мозга характеризуются избирательной проницаемостью для прохождения определенных молекул, что связано с наличием так называемых плотных контактов, формируемой эндотелиальными клетками з Солгшинстве мозговых капилляров, что отличает их от множества других капилляров.
й недавних исследованиях, проведенных на изолированных капиллярах юзга, было показано наличие в них рецепторов для ряда макромолекул - таких как инсулин, трансферрин, катионизироваиныя альбумин, катионизированный иммуноглобулин G. Эти соединения опосредуют трансцитоз веществ через эндотелий капилляров мозга, т.е. через гематоэнцефалический барьер (Parc'ridge W.М., 198В).
Существуют различные способы целенаправленной доставки лекарственных вешеств в моаг : инвазивнне, фармакологические и физиологичные. Развитие последних основано на использовании специфических транспортных систем, в которых петранспортируенне через
гематоэнцефалический барьер пептиды - бета-эндорфин, интерферон,
иктерлейкины, фрагменты антител, ковалентно связываются с
транспортируемым белком, например, инсулинок. или трансферриком,
и этот комплекс подвергается рецепто, -опосредованному йарекосу
через гематоэнцефалический барьер (Pardrldae W.M... 1986 ;
Pardrldge V.M. et al., 1990). ,
В настояне время ведется поиск новых веществ, проникающих через гематоэнцеф-шгаеский барьер, поскольку не всегда возможно использовать в качестве носителя белки, обладающие эндогенной активность», таете как инсулин и трансферрюі, а также белки, которые являются сильными иммуногенаш, например, катионизирован-ный альбумин или катионизировшшый ишуноглобулин G (Triguoro D. et al. , 1989, 1990).
Известно, что поликатионвые белки, такие как протамин, полилизин и его кон'ьюгаты с ферментами, а также гистоны увеличивают проницаемость клеточных меыбрая, включая лаквшарныа мембраны эндотелия капилляров мозга, для других веществ (Scheeberger Е. Е., 198? ; Strausbaugh L. J., 1987). Зги белки можно рассматривать как потенциальные средства для переноса штранспортируемых обычно агентов черзз гематоэнцефалический барьер.
Цель работ^.. Цель настоящей работы состояла в оценке возможности пронкккозенш в шаг экзогенного судааркого гистона и последующего использования его в качестве белка-носіггеля ври синтезе ковалентны* гадаъюгатов с лекарственными веществами, сб-дадащими низкой способностью проходить через тканевые барьеры.
Задачи исследования. 1. Лровеетк количественную оценку поступления экзогенного суммарного гистона в мозг после введения меченого препарата в русло крови анестезированных крыс.
-
Оценить возможность проникнеомюга суммарного гистона в нервную їкань различных отделов мозга, используя гиеторадиоав-тографический подход.
-
Разработать оптимальные условия проведения реакции ковалентного связывания суммарного гистона с антибиотиком канашии-ном (катернії сам по себе плохо проникает в «саг) через гдутаро-вый альдегид для получения растворимых конъюгатов.
-
Исследовать некоторые физико-химические свойства суммарного гистона и его коныогатоа с канашцином.
Научная новизна работы, йіервью в гисторадиоавтографическом исследовании гок&вано, что экзогенный суммарный гистон проникает
- з -через гематоэицефалический барьер в нервную ткань определенных отделов мозга после его введения в сонную артерию анестезированных крыс. <йотко-химическими методами установлены параметры для оценки стабильности препаратов суммарного гиотона, в том числе и гемсчест», доступных для модификации аминогрупп. Выявлены опти-«альяью условия проведения реакция ковалентного связывания суммарного гистона с антибиотиком канамицином через глутаровый альдегид. Впервые получены растворимые колгюгатн суммарного гистона с канамицином и определены их некоторые физико-химические свойства.
Практическое значение работы. Обоснована возможность использования препарата суммарного гистона в качестве потенциального носителя лекарственных веществ. Заложена основа для синтеза кояъюгатов суммарного гистона о лекарственными веществами, слабо проникающими через тканевые барьеры, что расширит арсенал медикаментозных средств для лечения ряда заболеваний.
Апробация работы. Материалы диссертации обсуждены на заседания Отдела бкохш-ии. Санкт-Петербургского государственного университета.
Публикации, to теме диссертации опубликована одна работа
Структура и объем работы. .Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов и результатов исследования, их обсудцения, заключения, выводов и списка литературы (235 источников). Материал излолвя на 154 станицах, содержит І1 рисунков и 9 таблиц. Протокольное материалы представлена а приложении.