Введение к работе
Актуальность проблемы. Одной из ключевых проблем современной медицинской науки и смежных с ней дисциплин является поиск путей повышения эффективности терапии злокачественных новообразований. Развитие опухолей представляет собой сложный морфогенетический процесс, полностью интегрированный в систему жизнеобеспечения организма. Интенсивные метаболитнческие потребности опухолевых клеток требуют адекватного снабжения их питательными веществами. Известно, что поддержание роста злокачественных новообразований тесно связано с процессом ангиогенеза, заключающегося в образовании кровеносной сосудистой сети, титающей опухоль. Подавление ангиогенеза приводит к резкому торможению роста опухолей и развития регионарных метастазов. В связи с этим особенно актуальной задачей является разработка методов получения и изучения возможностей терапевтического применения антиангиогенных препаратов, среди которых наиболее перспективным является
&НГИОСТЭТИН мощный эндогенный ингибитор ангиогенеза, образование
которого инициируется рядом опухолей. Также важным представляется
исследование антиангиогенного потенциала известных хорошо
себя в клинической практике препаратов, обладающих
действия (стимуляция иммунной системы,
подав_ПЄНІ*е роСТІ опухолей способность снижать мутагенность
химиопрепаратов и т д ) Одним из таких препаратов может служить интерсЬерон изучение антиангиогенного и противоопухолевого действия кotoрoto в комбинированной терапии совместно с противоопухолевыми
ПТ1еПЯ ратами ня ппавл Рннл m дейстиня МПЧСЙТ ППИвесТИ к ЗНачИТеЛЬНОМУ vRpnif4PHHHi irhrheKTHвHnPTH прчрния онкологических заболеваний
Несмотря на достигнутые в последние годы успехи в применении антиангиогенных агентов в области онкологии, необходимо отметить, что хотя их действие приводит к эффективному торможению роста опухолей, после прекращения терапии происходит быстрое возобновление опухолевого роста. В связи с этим особую аетуальность при лечении онкологических заболеваний приобретает комплексная терапия, основанная как на прямом цитотоксическом воздействии на опухолевую клетку, так и опосредованном через систему кровоснабжения опухоли. Однако, применение химиопрепаратов, в свою
очередь, имеет ряд ограничений, важнейшими из которых являются низкая избирательность их действия и развивающаяся в короткие сроки резистентность опухолевых клеток к лекарственным препаратам. Одним из наиболее перспективных путей повышения терапевтической эффективности химиопрепаратов является их избирательный транспорт в виде конъюгатов с белковыми векторными молекулами. В связи с этим актуальной задачей исследования являлось получение конъюгатов ЛФП и ЭФР с доксорубицином -препаратом, широко используемым в клинической практике, а также сравнительное изучение противоопухолевой активности полученных конъюгатов. Параллельно решались задачи разработки метода препаративного выделения ангиостатина и изучения антиангиогенной и противоопухолевой активности ангиостатина и интерферона in vitro и in vivo.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось получение и
исследование возможностей применения в области противоопухолевой терапии
антиангиогенного препарата ангиостатина, интерферона-сс и
противоопухолевых препаратов направленного действия (конъюгатов доксорубицина с АФП и ЭФР). Для осуществления этой цели были поставлены следующие задачи:
1. Разработать модифицированную методику получения ангиостатина из
плазмы крови человека, позволяющую выделять белок в препаративных
количествах.
-
Оценить цитотоксическую активность препарата in vitro в отношении линий эндотелиальных и опухолевых клеток и исследовать противоопухолевую активность препарата in vivo.
-
Изучить антиангиогенную и противоопухолевую активность интерферона-а in vitro Б отношении опухолевых и эндотелиальных клеток человека и мыши.
-
Синтезировать конъюгаты доксорубицина с векторными белками (АФП, ЭФР) и исследовать цитотоксическую активность полученных конъюгатов на культурах опухолевых и эндотелиальных клеток.
-
Изучить возможность снижения резистентности опухолевых клеток к доксорубицину при его применении в составе конъюгатов с АФП и ЭФР.
6. Сравнить химиотерапеатическум эффективность докссрубицина в составе конъюгатов с АФП и ЭФР со свободным препаратом в модельных экспериментах in vivo. Исследовать возможность совместного применения полученньгх конъюгатов и интерферона-а для лечения опухолей В1б у мышей.
Научная новизна и практическая ценность работы. Разработаны модифицированные методики выделения и очистки ангиостатина, а также синтеза и очистки препаратов направленного действия на основе доксорубицина и векторных белков (АФП, ЭФР), позволяющие получать активные и высокоочищенные препараты. Путем протеолитического расщепления получен ряд фрагментов плазминогена, проявляющих выраженную антиангиогенную активность. Наиболее высокая антиангиогенная активность продемонстрирована для ангиостатина, применение которого in vivo позволяет значительно замедлить рост опухолей и увеличить продолжительность жизни экспериментальных животных. Впервые продемонстрирована возможность использования интерферона-сс в качестве антиангиогенного препарата при противоопухолевой терапии Показана терапевтическая эффективность интепкЬерона-сс in vivo при лечении мышей с
болєс высокяя эсЬ(Ьєістивность противоопухолевого действия конъюгатов /ТР с АФП и "-ІФР по гпавнрнитп сг\ то^ппчым антибиотиком в
противоопухолевого действия препарата АФП-ДР за счет включения в терапевтическую схему интерферона-а.
Структура и объем работы. Диссертационная работа содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты работы и их обсуждение, выводы и список цитируемой литературы.