Введение к работе
Актуальность проблемы. Одной из важнейших проблем практической онкологии является повышение избирательности химиотерапевтических препаратов в отношении злокачественных новообразований. Терапевтическое применение противоопухолевых препаратов часто оказывается недостаточно эффективным и сопровождается множеством побочных эффектов. Так, применение фталоцианинов вызывает нейтропению, атрофию тканей^ приобретение фоточувствительности нормальными тканями (Rousseau J. et al., 1991). К побочным эффектам, вызываемым антибиотиками антрациклинового ряда (доксорубицин, карминомипин), относятся угнетение кроветворения, сильные иммуносупрессивные и кардиотоксические эффекты (Wang J.J. et al., 1971). Растительные алкалоиды (винбластин, винкристин) вызывают повреждение центральной нервной системы, двигательные расстройства и лейкопению. Одним из путей повышения терапевтической эффективности перечисленных выше препаратов является их избирательный рецепторопосредованный транспорт в опухолевые клетки в виде конъюгатов с белковыми векторными молекулами. Избирательность транспорта при этом достигается в результате специфичного взаимодействия вектора с его рецептором на поверхности клетки-мишени с последующей внутриклеточной интернализацией лиганд-рецептррного комплекса. Следует отметить, что белковые векторы должны отвечать ряду требований, к числу которых относятся: доступность белка в препаративных количествах, стабильность, сохранение высокого сродства к рецептору после химической модификации (конъюгирования) вектора. Этим требованиям в полной мере отвечают онкофетальный белок альфа-фетопротеин (АФП) и эпидермальный фактор роста (ЭФР). Кроме того, рецепторы АФП экспрессируются практически
всеми типами раковых клеток, но отсутствуют или присутствуют в небольших количествах на клетках нормальных тканей (Naval J. et al., 1985; Geuskens M. et al., 1991). Наличие, большого количества рецепторов ЭФР на поверхности клеток широкого спектра опухолей эпителиального происхождений также определяет возможность использования белка для избирательного транспорта противоопухолевых препаратов (Kroning R. et-al., 1995). В связи с этим актуальной задачей является получение противоопухолевых препаратов направленного действия с использованием фталоцианинов, доксорубицина и карминомицина, а также винбластина и винкристина в качестве цитотоксических препаратов, а АФП и ЭФР в качестве векторов для их избирательного транспорта. Также представляется важным сравнительное исследование в модельных экспериментах in vitro и in vivo уровня противоопухолевой активности и возможностей терапевтического применения полученных противоопухолевых препаратов.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось исследование возможности повышения противоопухолевой активности фталоцианинов алюминия (ФЦ(А1)) и кобальта (ФЦ(Со)), антрациклиновых антибиотиков доксорубицина (Др) и карминомицина (Км) и растительных алкалоидов винбластина (Вб) и винкристина (Вк) за счет их избирательного рецептор-опосредованного транспорта в клетки-мишени с использованием АФП и ЭФР в качестве векторных молекул. Для осуществления этой цели были поставлены следующие задачи: 1. Провести сравнительное исследование цитотоксической активности противоопухолевых препаратов (ФЦ(А1), ФЦ(Со), Др,
Км, Вб, Вк) и их конъюгатов с АФП и ЭФР in vitro в отношении линий опухолевых клеток человека и мыши.
-
Оценить противоопухолевую активность исследуемых препаратов и их конъюгатов in vivo на модели перевиваемых солидных опухолей мышей, формируемых клетками линий миелолейкоза Р388 и меланомы В16.
-
Основываясь на полученных результатах, выделить из ряда исследуемых конъюгатов препараты, обладающие высокой противоопухолевой активностью, которые могли бы быть использованы для создания высокоэффективных противоопухолевых лекарственных средств направленного действия.
Научная попиэна и практическая ценность работы. Получены конъюгаты противоопухолевых антрациклиновых антибиотиков, растительных алкалоидов и фталоцианинов с АФП и ЭФР, проявляющие цитотоксическую активность, превышающую активность свободных веществ in vitro. Впервые in vivo проведено сравнительное исследование противоопухолевой активности ФЦ(А1), ФЦ(Со), Др, Км, Вб, Вк и их конъюгатов с АФП и ЭФР. Убедительно продемонстрировано, что терапевтическая активность исследуемых противоопухолевых препаратов может быть значительно увеличена за счет их избирательного рецепторопосредованного транспорта в опухолевые клетки с использованием АФП и ЭФР в качестве векторных молекул. Результаты проведенных исследований могут быть использованы для разработки на основе полученных конъюгатов высокоэффективных противоопухолевых препаратов направленного действия для клинического применения.
Структура и объем работы. Диссертационная работа содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты работы и их обсуждение, выводы , и список цитируемой литературы.