Введение к работе
Актуальность теми.В настоящее время известно действие отдельных компонентов пики на различные метаболические систріяі, субклеточные структуры и клетки в целом, что позволило выделить на каждом из уровней оргяшюании Функциональное звено, наиболее чувствительное к изменению характера питания (Л.А.Покровский, "1974; В.Л.Тутелькн, 1977; М.М.-Г.Гштяров, 1970; М.М.Левачев, 1980; В.Б.Спирнчев, 1980). Одной из таких систем является лизосомалыщй аппарат клетки, обеспечивающий регуляцию интенсивности обмена практически всех необходимой для нормальной жизнедеятельности макромолекул на ста,щга их катаболизма (А.А.Покровский, В.А.Тутельян, 1976; А.Барретт, М.Хит, 1980;
Р.ДИН, Г 901; Т.А.КоролеНКО, 1990; Wicderanders В. at.al., 19341 Mrschfee Н. , Bsrt-ott (\. J,, 19Q7).
Предыдущие исследования позволили формулировать положение, что функция клеточного питания лизосом у млекопитающих при определенных алиментарных состояниях обеспечивает реализацию ряда физиологических процессов в норме и патологии (В.А.Тутольян, А.В.Васильев, 1932, 1987, 1990). Однако изучениэ особенностей Футпшионирошгая споциыш-зированных ферментних систем лизосом, определяющих реакцию этих суб-клеточігах структур на качественный и количественный состав пищи в различных органах и типах клеток, носит весьма ограниченный характер, тогда как расшифровка этих механизмов является необходим этапом на пути детального познания закономерностей биохимической адаптации организма, в том число и к характеру питания (В.А.Тутельяп, 1980; Л.Е.Пэшш, Н.Н.Маянская, 1987). Среди ферментных систем лизосом наибольший интерес с точки зрения функциональной значимости,.
особенностей специфичности, распределения в клетках и тканях представляют протеолитическио ферменты, внимание к которым не ослабевает
На Протяжении МНОГИХ ЛЄТ (Mayer R.J., Вег G.,' Laszlo L., 1990).
Вместе с тем, хотя и сформулированы определенные представления о биогенезе, нроцессинге и регуляции активности протеолитических ферментов лизосом (Л-.А.Локшина, 1979; В.В.Мосолов, 1983; Л.А.Локшина, . Э.А.Дилакян, 1985; Л.А.Локшина, В.С.Біілинкина, 1990; Turk v., і9Вб« ptniier v., 1990) вопрос об особенностях регуляции лизосомальных протеиназ различных групп (аепартатных, тиолових) и их физиологической роли остается открытым.
Цель и задачи исследования. Цояыо работы явилась попытка расшифровать механизмы регуляции, лизосомальных протеиназ различных груїгл -аспартатных (катьпсшш о) и тиолових (катепсшюв В, Н, і.) в норме и при активации процессов клеточного гштаїшя. Задачи исследования включали :
сравнительное изучение активности лизосомальных протеиназ и других лизосомальных гидролаз в печени, почках и селезенке крыс в условиях полного парентерального питания;
сравнительное изучение активности лизосомальных протеиназ и другаг лизосомальных гидролаз в различных органах крыс (пече-нь, почки, селезенка, тимус, скелетные мышцы, сердце, мозг) при белковом голодании;
изучение отдельных особенностей биогонеза лизосомальных ПрОТьИ-. наз при различном . уровне шгибирования биосинтеза белка (транскрипции, трансляции)!
изучение взаимосвязи между активность») тиолсьих протеиназ лиао-сом и содержанием их ендогенних ингабито|юа в норме и пои Оелковом
голодании.
Научная новизна. Впервые установлено, что при активации процессов клеточного питания, индуцироваїпшх условиями полного парентерального питания или белкового голодания активируется система катепсин D-за-висимого протеолиза и в случае белкового голодания подавляется активность систем тиоловых протеиназ независимо от уровня потребления серусодержащих аминокислот. Впервые получены доказательства существования различных типов регуляции активности тиоловых протеиназ ли-зосом - срочный тип регуляции эндогенными ингибиторами и регуляция активности ферментов этой группы на уровне транскрипции. Получешша данные имеют существенное значение для понимания процессов биогенеза, посттрансляционного процессинга и регуляции активности тканевих протеиназ.
Научно-практическая значимость. Предложен простой способ выделения суммарной фракции термо-, кислотостабильных ингибиторов тиоловых протеиназ из печени крыс, что в сочетании, с разработанным методом оценки специфической янгибиторной активности по папаину, катепсинам В,и l позволяет разработать принципиально новые критерии оценки функционального состояния лизосомального аппарата при патологичегасих состояниях алиментарной этиологии.
Апробация работы проведена на расширенной конференции отдела биохимии и физиологии питания Института питания АМН СССР (1990 г.). Основные положения работы долокрны на XvID, ХіХ научной конференции молодых медиков Грузии(Тбилиси, Х98Э, 1990) и на симпозиуме "Mechanism and Regulation of lntracel lular .protein cataboli »ffl" (БуДапШТ,
1990). Основные полоаения работы отражены в 5 публикациях.
Структура диссертации. Работа состоит из введения; обзора литературы, представленного в 3-х разделах; экспериментальной части, вялю-