Введение к работе
.
'Актуальность проблемы. Исследование механизмов
взаимодействия гриба - паразита и растеши - хозяина относится к «иолу основных проблем современной фитопатологии.
Среди многочисленных патогенних факторов возбудителей болезней растений пектолнтические ферменты привлекают особое внимание, так как они участвуют в процессах проникновения патогенов, в растение, развитии симптомов поражения и индуцируют защитные реакции растений. Поскольку пектолитические ферменты являются гликопротеинаии. они могут принимать участие в процессах узнавания при установлении контактов меаду взаимодействующими организмами {Albersheim, Anderson-Prouty. 1975; Davis et al. , 1986].
Познание биохимических процессов взаимодействия паразита и растения-хозяина имеет больоюе народнотхозяйствеяиое значение для создания новых способов борьбы с болезнями рзстенкП с помощью специфического подавления ключевых звеньев в процессах взаимодействия организмов безвредными для окружагавей среды веществами.
В настоящее время пектолитические ферневты ряда грибов охарактеризованы по некоторым -биохимическим параметрам (Cervone et al., 1986]
Однако у некоторых фитопатогенннх грибов, в частности у
Verticilliura dahliae и Phytophthora . infestans. ПЄКТОЛИТИЧЄСКИЄ
ферменты слабо изучены. Очень мало сведений об кнмунохимических свойствах этих ферментов у названных грибов. Иежду тем такие свойства могут иметь большое значение при взаимодействии гриба и растения IDe Vay at al.. 1981]. интерес представляет изучение не только самих пектолитических ферментов. но и механизма взаимодействия их с клеткой растения - хозяина. Именно этот аспект проблемы может быть решен с помощью методов иммунохими.
Нель и задачи исследования. Целью представжеяной работы было имглуноэлектрофоретическое исследование пектолитяческих ферментов: полигалактуроназы, пектинлиазы и пектинметилэстеразы и их миояеетвенных ферм у грибов. различавшихся по характеру взаимодействия с растешшми: Verticilliuia dahliae - возбудитель вилта хлопчатника, Phytophthora infestans - возбудителя фитофтороза картофеля, а также определение, изоэдектрических точек множественных форм пектолитических ферментов. P.infestans и
Aspergillus niger. ИНВертаЗЫ препаратов V. dahliae.
Были поставлены следующие задачи.
і. Разработать методику идентификации активности
пектолитическшс ферментов в иммунопрецилитатах и проанализировать
проявление активности пектолитических ферментов з
иммунопрецилитатах.
-
Исследозагь иммунологическое сродство множественных форм полигалактуроназа v.dahliae, пектинметилэстеразы p.infestans. штертазы v.dahliae
-
Изучить участие пектолитических ферментов в сЕязквании экстрацеллюлярша метаболитов гриба (ЭМГ) p.infestans с препаратом цитопаазматическях мембран картофеля.
Ншзнаа новизна работы. В результате проведенных
исследований разработана методика идентификации пектолитических
ферментов (полигажактуроназы, пектиняиазы и петинметилэстеразы) в
иммунопрецилитатах. Показано, что полигалактуроназа v. dahliae
имеет множественные формы как нммунологичесхи родственные, так и
иммунологически различные. Множественные формы
пектинметилэстеразы p. infestans иммунологически различны. Пектолитические ферменты p.infestans могут связываться с препаратом цитоплазматических мембран картофеля. Уточнены изоэлектрические точки множественных форм пектолитических ферментов P.infestans и A.niger.
Практическое,, значение,., работа Разработанная нами методика идентификации пектолитических ферментов в иммунопрецилитатах позволяет определять эти ферменты в смеси, в культуральном фильтрате, в гомогенате мицелия и не требует очистки ферментов до гомогенного состояния. Иммукоэлектрофорез проводится с поливалентной савороткой. Использование таких препаратов и разработанной методики делает более доступным и удобным проведение исследований, а так же серийных экспериментов.
Разделение множественных форм ферментов перекрестным ИЭФ -иммуноэлектрофорезом дает возможность исследоаать избирательное влияние различных веществ, ослабляющих и уничтожавших фитопатогенный гриб, на множественные формы,, выявляя формы более подверженные их действию.
Апробация. Результаты исследований доложены на 4-ой Всесоюзной конференции "Биосинтез ферментов микроорганизмами" (Ташкент. 1988); Всесоюзном совещании "Биохимия хранения
картофеля, овощей и плодов" (Москва. 1988): Всесоюзном совещании "Молекулярные и генетические механизмы взаимодействия микроорганизмов с растениями" {Пущине 1989) .
Публикации. Результаты исследований изложены в 8 публикациях.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и содержит таблицы. рисунков. Список литературы включает названий, из них ва русском и на иностранных языках.