Введение к работе
Актуальность проблемы
Весьма актуальным вопросом современной биологии и медицины является вопрос о глубине и характере сходства процессов эмбрио— и канцерогенеза. В связи с этим особый интерес представляет изучение онко—фегальных белков как маркеров опухолей и как нормальных компонентов фетальных тканей человека.
Бурное развитие методов иммунохймкческой диагностики во многом связано с появлением различных видов иммуноферментного анализа (ИФА). ИФА значительно потеснил радиоиммунологический и другие методы анализа и начал интенсивно внедряться в практику. Необходимо отметить, что ключевым моментом при любом иммунологическом исследовании является строгая характеристика используемых антител. Недостаточно полно охарактеризованные антитела могут давать артефакты, которые зачастую трудно выявить. Такие явления могут наблюдаться при работе с гипериммунными сыворотками против различных антигенов. Решением этого вопроса послужила разработка гибридомной технологии, позволяющей получать моноклональные антитела, строго индивидуальные по специфичности и физико-химическим свойствам, легко доступные в больших количествах, что весьма важно при решении научных и практических задач.
Одним из онко—фетальных белков явлется трофобластический бета— 1 глккопрогеин (SP1). Обнаружение SP1 в эмбриональных тканях и опухолях, а также в сыворотках крови беременных женщин и онкологических больных позволяет оценивать специфичность и диагностическую ценность этого антигена как маркера беременности и опухолевых заболеваний.
Большой интерес для практической онкологии представляет
также поиск новых критериев для мониторинга трофобластической
болезни и дифференциальной диагностики между
хорионкарциномой и пузырнцм заносой; которые возможно проводить с помощью высокочувствительной тест —системы для определения SP1.
Цель исслелования состояла в получении моноклональных антител к SP1, проведении иммунохимических исследований этого антигена, создании иммуноферментного теста для количественного определения SP1. Также ставилась задача оценки диагностической ценности разработанного теста для ранней диагностики беременности, скрининга и монитрринга беременности и трофобластической болезни на клиническом материале.
Научная новизна
Получены и охарактеризованы < несколько линий гибридом,
продуцирующих моноклональные антитела к SP1. Моноклональные
антитела, продуцируемые полученными гибридомами,
охарактеризованы по взаимодействию с антигеном SP1 и применимости для создания тест—систем.
На основе моноклональных антител, продуцируемых этими гибридомами разработана диагностическая тест —система для количественного определения SP1.
Показана возможность использования SP1 для
дифференциальной диагностики между хорионкарциномой и пузырным заносом, а также для прогноза течения хорионкарцииомы.
Оценено диагностическое значение соотношения содержания SP1 к бета — субъединице хорионического гонадотропина при мониторинге трофобластической болезни.
Продемонстрирована высокая информативность теста на SP1 в диагностике беременности и различных патологий беременности. Обнаружено существенное различие в уровне содержания SP1 в ходе нормальной беременности у женщин Европейской части СНГ и женщин Юго-Восточной Азии.
Внедрение результатов
По результатам работы Фармокопейным комитетом составлены
изменения к ВФС 42—169ВС-88 "Тест — система
иммуноферментная для определения трофобластического бета — 1
гликопротеина". і
Иммуноферментный (ИФ) набор был использован для скрининга и мониторинга беременности и трофобластической болезни в клинических учреждениях г. Москвы, а также в акушерско — гинекологическом госпитале Ты Зу (г. Хошимин, Вьетнам). Получено разрешение Министерства здравоохранения Вьетнама на использование тест — системы в медицинской практике.
Анробапия работы.
Результаты проведенных исследований и отдельные фрагменты доложены и обсуждены на Международном симпозиуме "Маркеры новообразований" (г. Кошице, Чехословакия, 1990 г.), Международном симпозиуме "Будущее онкофетальных белков" (г. Осака, Япония, 1991), Всесоюзной конференции "Актуальные направления и новые методы в молекулярной биологии" (г. Рига, 1990), Всесоюзном симпозиуме "Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии" (г. Самарканд, 1991).
В завершенном виде диссертационная работа апробирована 24 сентября на заседании отдела биохимии Научного Центра молекулярной диагностики и лечения МЗ России.
Объем и структура работы.