Введение к работе
Актуальность проблемы. Вирус иммунодефицита человека
Wi-І) и вирус гепатита В (ВГВ) являются возбудителями опасных
фекционных заболеваний - синдрома преобретенного иммуяодефи-
та (СПИД) и гепатита а СПИЛ - тяжелое поражение иммунной
стемы, сопровождающееся развитием оппортунистических инфекций
неопластических заболеваний, неизбежно приводящих к детально-
иеходу. ВГВ является причиной не только острой формы гепати-
, но и хронических форм - цирроза печени и гепатоцеллюлярной
рцинсмы. Одним из путей распространения этих инфекций являет-
их передача с донорской кровью.
В борьбе с этими инфекциями, наряду с другими, активно звиваются направления, связанные с созданием вакцин против вс вирусов и методов своевременного выявления больных и виру-юсителей. Оба этих направления опираются на получение вирус-i антигенов. В последние годы вместо естественных вирусных :игенов как для вакцин, так и для диагностических систем все >е применяются генно-инженерные белки вирусов, экспрессируе-! в различных системах или синтетические пептиды.
Во всех случаях эффективность применения вирусных антиге-I как естественных, так и подученных биотехнологическими ме-[ами для вакцин и диагностики зависит от степени их чистоты, іуногенности, способности связыватся с антителами, вырабаты-вдимися у больных или вирусоносителей. В связи с этим, иссле-ания, связанные с разработкой методов получения, очистки ре-бшантных антигенов ВИЧ и ВГВ, а также характеристикой взаи-ействия этих антигенов с- антителами больных и вирусоносите-являются чрезвычайно актуальными.
Дели и задачи исследования. Основной целью настоящей рабс-была разработка методов получения высокоэффективной чистки омбинантных белков вируса иммунодефицита человека и вируса атита В, а такяе^ исследование иммунологических свойств __ и можностей использовали* этих полипептидов для исследований эроток крови на наличие антител к вирусу и создание новых иантов таких систем.
Научная новизна работы. Получены клетки Е. col і DH1(X) с эмбинантной плазмидой pASX3. зкспрессирущие гибридный бе-, содержащий полную последователиность В-галактозидазы и ви-специфическую последовательность оболочечного белка ВИЧ-І. ученный белок обладал зирусспйцифическими антигенными свояс-
- г -твами, которые были сравнены со свойствами химерных белков, содержащих другие вирусспецифические последовательности. .
Исследованы различные варианты очистки белков и разработаны технодогные варианты очистки: для белков ВИЧ-1 - на основе гель-фильтрации, а для поверхностного антигена ВГВ - с помощью аффинной хроматографии на основе моноклональных антитех
Практическое значение работы заключается в создании диагностических тест-систем на основе генно-инженерных антигенов для определения антител к ВИЧ-1 и ВГВ в сыворотках крови людей с применением В-лактамазы и пероксидазы.
Апробация работа Результаты исследований были представлены на 19 и 20-й конференциях ОЕБО (Италия, 1989 и Венгрия, 1990). В завершенном виде диссертационная работа апробирована 28 ноября 1990 г. на заседании кафедры биохимии Биологического факультета МГУ,
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ.
Обьем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (включающей разделы "Материалы и методы", "Результаты и обсуждение"), выводов, списка литературы, содержащего 197 работ. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста, включая 19 рисунков.