Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Создание и совераенствование новых средств специфической профилактики и диагностики занимает важное :.<осто з борьбе с туляремией. Основу разрабатываемых современных молекулярных ваяши и дпагностикуусв составляют протективныв компонента микробоз и зысокоспецифичные чоно.клональк-'е антитола.
иднако отсутствие ;:счер.туза-сс;лх сведений о ваянєії'тлх антиге
нах їгалсізеїіа tulareasia является одной из основных при
чин, сдергивающих исследования в этом направлении. Многолетнее
изучений гуляремнйн.ух бактерий не привело к выявлению факторов
латогенкосги и не позволило еыяснить механизмы внутриклеточного
ларазитирсвания.При этом до настоящего времени остается дискус
сионным вопрос о природе защитного иммунитета при туляремии.
К числу наиболее изученных антигенов ?-tularensts отно-
сятся мембранные белки, причлегсаетие вниуанн исследователей з связи с их ведущей ролью з формировании Т-к точного иммунитета ( Sandstroa, 1987, -^990; Sureel, 1390; Sjost-dt, 1990). Основним;': имыунорзагстивнымл бел.чачи внслнеЯ ?.;емб; .-злы тулярзм1 "щого микроба являются протеины' с молекулярными массами 10-14 кД, 17-20 кД, 41-43 кД С Fop а), 47 кД и 63 xl (Родионова, 1989; ^oatedt, 1990; Bevanger, 1983; Дано, 19.33).
В настоящее время у туляремийнсго микроба обнаружено три белковых компонента с молекулярными массами 40 кД, 63 кД, 67 кД, ззаимодействуааих с иммуноглобулинами, человека (Некляе'в, 1990; Хлебников, Коровина 1990, 1992). Известно, что белки 40 кД и 67 :сД конкурируя? с протонном A staphylococcus aureus за область саязызания с ?с -йрагментом IgG. Значение туляремийкых IgS -оецептсров з формировании специфического иммунитета че ^нчененс.
Ц2лЬ РАБОТЫ. Изучение 5и?и;:о-х;:мических и биологических ^ю>Ьу;в иккуноглобуликезязува дего белка 63 нД знезкей мембраны F.tularc-asis.
ЗАЛА-СІ іг^шояалж- Г, Разработать эффективные способа зцд ления л оппсткл белка. ІЗ ,; ?t'.s~xou \;evop.'U--y -.'^t-lareaais.
~. Получить чсиС'?лс:і?Л"НЬ!Є антитола, специфичные к белку :J ц[ "-r'"'::-:c': -j:.:::'"'.:'-'.: "-tularensis.
-
Опі;Сдйл:і-і! осі;зї.:-д-і і:;.ї^кг;:;::.:::цс::ісие :; і:зико-^зоичсскпе ^up^rrcps.csicns хкд:;й 63 ісі:. _
-
Вддсл;д-ь іл:тодЬ..; ирулялс;! :сра\сл'сгрфї;і "а белой: 63 кД -сифарсзі-іхі : Х,у; чолсї:,с;с;і 5; дзучіїїь \ц; подіслассов'.уя принодлсжлссгь.
.5. ІЬіга-.і'.зсгх-іь учссгек Сіікгаіг.'.ї;і5. ьа молекуле І~,0 челове
ка ддя белка 63 кД. і
6. Мсслсдозіїь лре^скудк-гд; сізс:1аті;а"'беліса 63 рД гкедаей у.су—
бррд-и F.tulcrtjLsiG. -
НАУЧНЛД 1І02І5?,А. ддершг определены огггкиалыше условия получения лЗел::а 6S і$, u изучсіьі его осноьіщй ф'/зино-аіаические и і:уігупожї5К.;г^'есі;;:-о сьсйсгла. ЕоЙ;;ї;изнї эястйнкции белка в макск-іг/ьїє поглощения при 275,5 ні: состслдідєї 0,35 г'-л" -сі-Г'. S его состав еходлт-сноло 600 сіиіьо;с;сло-;щк остатков. .Бэлох Н2 содержит їрглтгоіраиа.» Содеодсзіо L ~о:іі:радеГ. в белке с оставляет 55+5 Й
Показало, чїо беле;: 53 кД избирательно связывается с іб(їц человека, -Ссікаружк.о два участка сгяонзишп див белка. 63 кД на молекуло -2sG -чєлої.скі;. HoKt^Lii:;.-ЕсамОїЦіОссь использования белка.
53 КД У.г.и1ЛЇКї::Іб . ' ДЛЯ ВДЦСЛЄЬИЯ .JgCj ЧЗЛЄБЄКа.
цояучед: vpii ркбрддсід:,. прсдуд;лрукд«-с IfiCft. к бедку 63 кД. Уста
новлена еозкогііость i-cnojiiSCDrH'.u; ІЩ длл оЗнарукєдал її очіїстки
белка 63 кД, " .
Зпервио проведень оцек::» ."йгддсїасхсзсдісів белг-сь. 53 яД її ксш-лексоо ЛІіС-балси 53 кД пид і::скері;;^?йЛї>ноі туляремии.
- її'Дліі^ЕСІШІ ЦЬЖСС.1Ъ. . ІЬлу^гад^е гдспсршеіі'гйльнке дд-інай «огуд tL^i ;-.іїїсль:,г-гл.:Л длл ^умед:;:, д.Чго-- и кьзунсгел-езь y.tu-Іагсдсіс, соддродісудоігдд", с^-лдста спіціїЬі^сслСїі диагностики з: ,пр-фи;ї«^тк;;: і-улядакйи. д тс:;..;;.- дд>: Еддйленкл а .исследования еисйс^ь Яйдкд~с:д;ь ' 'iriG' ^c^cjj-*a.
До результат*'»-; роботи гігдгстсчл-;н^ Ик^доукци;: до дагохо-хжл; .'и ;;о;-г?о.йр .' 3-сияг,иь<ікд*-ГО-:^лї.а 53 кД Кі 2ДїхІаг«іг.іЕ., уг-дзрддешш; дкршгюрод іс;сг;:дугі ї^глукологаи їй ^е::а5рл.І9«5 г.
На гкбрзідеуу F? i:-4f дредуедрушук кслоклональкие антитела, специфичный к белку 63 їді P.iulEatnsis., дедучиш п егерское
ЄЕИДЄ*ГЄЛЬСЇ0. . '
G исцсдьосзиДк-сх.: исце.-лсшельшп-г Ді.гі;тс-Л' согисстко с Німі ярі*~ гладкой іл/шрсбколсгії;і'іірсзіедсно jjafi'.-.a по кдендкідкзидд и ід-,-/1''*-ніж пс-і'-ц^бккантасг-с уелга 3 <;Д
АПРОБАЦИЯ РАБС1Ы И ПУБЛИКАЦИИ.' Материалы" диссертации доложенц на конференции-конкурсе молодых ученых "Актуальные проблемы биотехнологии" апрель 1988 г., п.Кольцово; на. 20-ои Европейском биохимическом съезде ( FHES), август 1390 г. Буд"пеягг;. на 11-ом Европейском иммунологическом съезде, июнь 1991 Хельсинки; на Всесоюзной конференции "Актуальные проблема профилактики туляремии", ноябрь 1991 г. Симферополь; на Российской научней конференции "Генетика и биохимия вирулентности особо опасных инфекций", октябрь 1992 г. Волгоград; на традиционных ежегодных конференциях Института иммунологии Г385-І990 гг.; }іа иежлабораторном сени-наре института, апрель 1993 г.
Материалы диссертации вопли в 3 научных отчета по законченным НИР, выполнявшимся в соответствии с плановыми заданиями Госконцерна "Биопрепарат". По теме диссертации опубликовано б печатных работ.
СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация -состоит іа 'зеденил,' литературного обзора, г'лазы,, отрау.ащей результати сосагвеннш: исследований, заключенияу выводов и списка литературы, Работа изложена і .а 135 страницах мааикописного тзхста-, иллюстрирована 2 таблицами и 25 рисунками. Библиографический указатель содержит 231 источник литература, в том числе 47 стєчсстеєянїк и 184 імостраищг.