Введение к работе
Актуальность яробдима
мурамкдпептиды (Щ)- структурные фрагменты пеатидоглиханз клеточной стенки бактерия муреина- оказывают разнообразные эффекты на иммунную я нервную системы человека и животных. Способность этих соединений проявлять адгюнантную активность, повывать неспецифическую резистентность организма к бактериальным, вирусным и паразитарным инфекциям , а также вызывать замедление роста и некроз некоторых опухолей свидетельствует о зозмолности использования их а качестве компонентов синтетических вакцин и лекарственных препаратов. В токе время мурамил-пептвды обладает рядом побочных эффектов,затрудняющих применение этих соединения в клинической практике.
Минимальной биологически активной структурой бактериального пептидогликана является мурамиддипептяд (ЦДЛ) - N-ацетклмура-мокд-аланил-О-изоглутамин. Ва его основе в ряде лабораторий мира,в том числе и в России , осуществлен синтез многочисленных аналогов , проявлявших арко выраженную иммуномодудирущую активность и не оказывающих побочного действия.
В институте биоорганическэ» химии им. М, Ы. ЗЬмякина и П. А. Овчинникова получена серая олигосахаридсодержаанх гдикопептидоз, отличащихся от ЦДЛ обязательным присутствием в молекуле N-ацетшг*лшоаамияш>нога остатка,соединенного ^(1-4)-гликоаид-иой связь» с N-ацетилмурамовой кислотой,и проявляипих Солее высокие адьтантные и противоопухолевые свойства К иастоядаму времени проведано структурно-функциональное исследование этих ссединений, научено влияние модификации отдельных частей молекулы на иммуномодудируюцие свойства in vivo и in vitro, налажено в промышленном масштаб» получение блшкайввго в рассматриваемой серии ведеств аналога ВДП - глшезаминидмурамилдипепти-даХПЩІ).
Однако,для целенаправленного создания эффективных лекарственных препаратов на базе мурамилпептидов требуется знание механизма их действия,который несмотря на значительное количество исследований ,до настоящэго времени остается невыясненным. Сузпествупаи» з литератур дяннт весьма противоречивы.
- 2 -Среди возможных молекулярных механизмов биологической активности бактериальных гликопептидов наиболее вероятным является рецепторний. Доводом в его пользу может служить стереоспецифич-ность действия ,а также насыщаемый характер гавискюстк доза-ответ для некоторых биологических аффектов. В то же время для подтверждения этой модели требуются дополнительные экспериментальные данные, с чем и связана актуальность исследований, направленных на изучение и характеристику иурамшшепетад-свя-зыващих молекул шкунокошегентных клеток.
Цель із вадачи ра&иы. Настоящая работа является составной частью проводимых в лаборатории иммунохимии Института биоорганической химии км. U. U. Иэмякина и Л А. Овчинникова РАН исследований молекулярных и клеточных механизмов биологического действия мурамшшептидов.
Цель работы - доказать существование специфических участков свягыванияв МП у иммунокомпетентных клеток, провести первичную биохимическую характеристику Ш-связывавдих молекул, оценить влияние мураынлпепткдов на процессы клеточой'активации.
Для достижения указанной цели предполагалось решить еледухг Сцие задачи:
-определить круг клеток-шшеквй МП;
-охарактеризовать взаимодействие мурамклпептидов с клетками-мкпєнями;
-установить локализацию участков свявывания Ш (на клеточной мембране или внутри клетки);
-с помощью фотоаффинного ыечеккя охарактеризовать Ш-связы-ваидие молекулы;
- изучить влияние ГЩП на изменение концентрации внутриклеточного Са++ и величину рН.
Впервые с помогав радиоактивно- и флуоресцентно-меченных прогводных ГЩШ обнаружены центры связывания мурамилпептидов внутри Т-клеток и макрофагов. Показана специфичность взаяюдей-ствкия мурамилпептидов с клетками ниелоьзоноцитарного ряда, рассчитаны константа диссоциации Е число участков связывания. Определены молекулярные массы некоторых ГЩШ-связываниях белков путей ковалентного лечения клеток, радиоактивным фотоактквируе-
мым соединением ГМЩ При лсслэлозаяки механизма зктизашп мзкрофагоз под дэйстзпэн ГВДП апервые обнаружено его здіяніїз на аедрояу ц-лтоплззьсшмэского рН.
Тесрятугчеслап я пргцсггркэгяаз 2Kaw"tniM3 райота.
Независимыми иэтодаьш продемонстркрааяно згакмсдеПстЕ'Ло му-раыкллпептидса с цктоялагматїгчесшіми структурам;! клеток мизло-моноцнтзрнсго ряда,что дополняет сутаэстзуЕтаэ представления о механизме дейстакя бактериальных глгасэпэптидов и сйъясаяет не-гсотсрьи биологические эффекты 131, з частности, большую активность лиг; с с малы-: ыл дерм данных соединения.
Установлена злі:ннке ПСП на зелічігау знутркклгточного рН, что указывает на актігааиііа незлектрегеннсго N^+/ Н+ обмена и uoar быть связано о модуляцией аіс:Енсс~п Са++ - независимая протеинклназ.
По материалам зкспер:;:.:октзлькьп: исследований .состззлэны і'з-тодкчэскиэ роксшндзшп "Испольг-ОЕЗнет метода фосозёфктюй -.a-дкфикгілгп белкоз :ї гнлтидоз для ;ідент;фікзці'Лї'і! гсзучзні'л рецепторов зят'лгемоз нсзбудлт-елзй оссЗо опасных :ш.>экшй" .татары были одсбренн Ученим советом РКйТІЧИ "Ійхрсй"( протокол U 7 от ЗО кшя 1932 гола) 'л утгорядены директором Ійсізтг/та 3Q ;кз-ня 1592 годз . Данлі-й іїзтод позволяет нсслэдсззть за уллеку-лярнсм урозко гпгогекэ?:те?с:стз м.?кзлигс.« ззбслеазний , зьелзй-иых зозбудіїтеляг/и оессо опасных инфекций,благодаря по з їх; гею ^ тії !!дэнг.!]глирсзат5 :і изучать рецептом различный биологически зкт:гзн'сг созд:шоії:гД, з тс.у члсл? :.нт:гэксз натогенн;/:: ;та:ро-оргаиизмоз і :: 2 групп.
Результаты дассертаїлп ;:oryr Сыть ::сплл;гс2-;ш ас:: ::оеле-дсзенлл !.;олзкулярньс: ігзхаїглзмзі; ге-Лстг!;:? ^.г.гугїс'.адулятсроз 2 iSX iv. и IL її. ,'ймякинз. и 3. Д.. Оачшшгесоза ГАЗ , Інституте зппде?»:*-олопгл ;f :-.о:крсб::олопгл РАііЛ , О-чяслснгасксм Центре» PA'S и группе организациях полезного нрофілл.
Лпп^кйлгтїп рлгйгггл ft ггсвхї'.:."глг
Осноакьге результатів диссертационной работа были арэяссазле-аы и ебсудзэны : аз. Йэллуайроллом са,шсз:г":а "Ійлзкуляркш фактору ггматапоээа п стнслоеой >с^от-аі'ЧНосклз,і93а;; i-a її-ст.: льеэд? 2зрслэлской 'Ззларзілпї 1Г\лгуг':лог;:т-ес;~г:с ОЗ'ЛЭС-та (сспсс, "гяля-дзгл, 1591) ; !-:a iiayvniK с -;лзлрзд лгСс^атдри 3.:-«укзїімяі ?3 Р?СГ (1 С-лЗ і»,і3?0 r,1931 -,ISSS Г }.
- 4 -Ш теш диссертации опубликовано 4 работы. Объем работы.
-^ Диссертационная работа изложена на 43*" страницах машинописного текста и состоит иа введения,литературного обзора,экспериментальной части, результатов собственных исследований и их обсуждения,выводов и списка цитируемой литературы,состоядего иг 190 наименований. Работа содержит Щ рисунков к 1 таблицу.