Введение к работе
„ , , .
' 4>.-';'.j(>i.MIi>—i'4«> **-$ i'l-il*»»*K?vf.b<^ ГЧІІ- '.
_ІІЛЇЇШ1УІ2'і?!._иЕ2!Ій;!Уі Учение о рецепторах станов, последнее
я одним из ва-Кїіпґіших разделов биохимии и молекуляр'но,,йл.би,ологті.
играет исключительно важную роль в изучении процессов .'жизнелоя-
чости, в понимании мохонинмов гомеостазя и патогенеза различима
'Леваний. ' '.,«.
Всесторонние исследования механизмов действия гормонов шито-юй железы за последние 20 лет привели к созданию теории.реали-іи их биологической активности. Основное положение зтой теории >ано с понятием "рецепторы", которые ответственны за.специфичес-связывание тиреоидных гормонов и преобразование гормонального іала в тот или иной вид биохимической й филологической..реакции.
Основой механизма действия тиреоидных гормонов считаа^ря вза-іействие их с ядерными или митохондриальиыми рецепторами. ( Tata, 2; pennon et al., 1903; Nunez, iqe.g^Ki^shi^et, al^ 9J$> ). iKO вопрос, в какой форме тиреоіцнь^. г^юні(" рррЪТ(^^1с,*в^у'грь ок, окончательно не решён. ,,„,,,;, Mft t {. ,,., .. ,.-..-,
Долгое время считалось, что тиреоидные гормоны, имея сравни
ло небольшую молекулярную массу.,и,-В;,силу своей гцдрофобности, от
дельно свободно диффундируют в'клетку, осуществляя своё влияние
;з внутриклеточные структуры ( sterling et al., 1У75; Као et al.,
l). Установлено также, что на уровне плазматических,мембран ПШ
ісходит дейодирование тироксина (ТдХ, и образующиеся, при. этом мо-
гли трийодтиронина (То) внедряются ,внутрь клетки (, Viaaerj 1988).
зторые автори утверждают, что в мембране клетки Т^ иТд. связнва-
1 с белковыми фракциями, которые но электрофоретической нодвиЖнос-
:ходны. о преальоумином сыворотки крови, отмечая большее сродство
і этой белковой фракции, чем Тд (Абдукаримов", Т979{гіМйрахмед0в и
, 1963). ' '
-'придал мембранную теорию действия тиреоидных гормонов. CiharM, геяапі (1979), показали наличие связьгааюіаихіместі для ;Т^ и Тд на аенных ПМ печени крыс. Дальнейшие многочисленные исследования, зрпдннме я атом направлении, подтвердили наличие рецепторов для
ГОДНЫХ ГОТЩОЧО:' на ПМ КЛЄГОЧ ПечеНИ, 'І.ибрі-К'ЛНСТОЯ, ЛИМфОЦИТОВ и
іьлиальііоїх к.'ісіо.ч молочных ::->елёз '/'Ь'.'.'ц of. yl., l'v:*:i; '.'.нх/ч ?! л -v
. ''I. '; l.iii!,., 14>V,; Л"1 с"! :>-гч--':ч О t .4.'.... !Ч:>) Г'}'^-),-. ,-'. -.].. 1Ч"Ч;
Несмотря на бадыцае количество работ, выполненных с целью и;
чыщя различных физико-химических характеристик внутриклеточных
рецецторов тиреоцдщлс гормонов, и и товидно* *едеэц на Щ, отзывчивых органов, лрирода этих рецепторе
не выяснена до конца и экспериментальный материал, накопленный v
еегадняощий день, не noa^Qseef достаточно чётко ответить ца ІЮПЇ
о pqjti меыбрацной рецепции 9 иеханизце действия гормонов щитавид
железы, '
В связи о этим, исследования по выделению, очистке и функци ной характеристике белков, связывающих тиреоидине гормоны на Щ, даются весьма актуальными как для выяснения роли мембранной реце в механизме действия тиреоидных гормонов, т^к и для изучения пат неэа эндокринных заболеваний, обусловленных нарушением чувствиге ности клеток-мишецей к гормонам щитовидной железы (гипотиреоз, г цертйреоз),
нЦель и задачи работу/ Целью рабати ярилось получение високої щенного рецептора тироксина из ЦЫ печени крыс.
Длд достижения этой цели были поставлены следующие эксперим* Тальцце задачиг ,
Исследовать связывание тироксина с выеокоочищецными іЬі не" ни крыс.
Изучить влияние фиэиодогическид доз тироксина иразличное тиреоидного статуса организма на активность системы АС-ся>*1Р в выс коочцщенных фракциях Щ печени крыс,
* Выделить и очистить рецептор тироксина из ДМ,-исследовать свойства и условия проявления биологической активности.
.Научная новизна работы, С помощью аффинной хроматографии pas работай метод выделения и очистки белка, связывающего тироксин ия ІШ.* Впервые нами из Ш печени крыс выделен и очищен рецептор тира сина. Определены молекулярная масса, аминокислотный состав и пара метры функционирования рецептора. Осуществлён процесс встраинания рецептора в. фосфолипидную мембрану и восстановления его функцнона ной активности.
На основании данных исследований показано, что конформацня р цептора, обеспечивающая его взаимодействие с тироксином на мембра определяется и стабилизируется окружающими лнницными молекулами.
_Научно-практическая ценность .работа.. Основные результаты настоящей работы позволяют сформировать положение о важной роли "мембранного этапа" в процессе рецепции тиреоидньпс гормонов И вычленить его как отдельную стадию в реализаций их биологического действия, а также являются теоретическим обосновакчем целесообразности и перспективне ;и дальнейших исследований, направленных на Выявление изменения структуры и функций рецептора В условиях гипо - и гиперти-реоза.
Методические приёмы, выработанные в процессе данного исследования, могут быть рекомендованы при работе, связанной с изучением рецепторних белков плазматических мембран.
Апробация работы. Результаты работы доложены на III Всесоюзном симпозиуме ilo биохимии лнпидов (Алма-Ата, І9В7), на ІІІ Всесоюзном съезде эндокринологов (Талжент, 1989), на X объединённом симпозиуме биохимических обществ СССР-ГДР "Механизмы регуляции клеточной активности" (Ташкент, 191Э).
Публикации. По теме диссертаций опубликовано 4 печатные работы.
Объём г и структура работы. Диссертационная работа изложена на > 116 стр. машинописи» состоит из введения» обзора литературы» bfltfc'a-ния методов исследования» изложения полученных результатов й их обсуждения, заключения, 'выводов и* списка цитируемой литературы (217 "'' ссылок), иллюстрирована 12 рисунками и 7 таблицами.