Введение к работе
Актуальность проблемы. Протеолитические ферменты микроорганизмов (в том числе термофильных) привлекают внимание многих исследо вателей.
С одной стороны, сравнение структуры и свойств этих .ферментов из различных источников важно в. теоретическом аспекте, расширяет представления об их яроисхоздвшш и эволюции, о причинах термоста-бильности белков и т.д. С другой стороны, протволитические фермента микроорганизмов находят широкое применение а производстве моицих и лекарственных средств, кожевенной и пищевой, промышленности И Т.Д. Поэтому выделение и исследование свойств протэшшз микроорганизмов в особенности термофильных, представляет значительный практический интерес.
Однвко, из известных протеиназ термофильных микроорганизмов подробно изучены лишь немногие - термолизш, архелизин I, терчи-таза. Совсем мало работ, посвященных продукции протеиназ в процессе культивирования микроорганизма г в этом смысла хорошо исследован лишь термоактиномицет Ihennoaotinomycea vulgaris. ,
На кафедре микробиологии МГУ широко проводятся работы по поиску перспективных продуцентов протеолитических феріентов. В иле горячего источника был обнаружен штамм Streptomycea (ранее Actinomyces) ther-movulgaria т-54 , проявляющий висовуй общую протеолнтическую и фиб-ринолитическую активность и продуцирующий, по-видимому, целый ряд протеиназ. Представлялось интересным изучить протеолитачески& ферменты этого стрептомицета.
Цель и задачи исследования. Целью работы была очистка и nepj вичная характеристика некоторых протеиназ streptomycea thermovul-gai-ia F-54. Для этого следовало:
-
Предварительно определить, какие протеиназы продуцирует Str.thor-movulgaria -54.
-
Проследить динамику секреции отдельных протеиназ при культивировании Str.thermovulgaria -54.
-
Разработать схемы очистки некоторых протеиназ и исследовать их свойства. ;
Научная новизна исследований. Получены впервые следующие резу-льтаты, представлявшие научную новизну: I. Покззано, что при выращивании на синтетической среде strahermo-
vulgaris ї-54 продуцирует по крайней мера четыре протеиназы, J3 том числе оіи.Аар-слбцифичную протеиназу, и субтилизиноподобную таолзависимую сериновую протеиназу. 8, Найдеш оптимальные условия продукции аіи.Азр-специфичной и ти-олзавлсишя сериновой протеиназ Str.thermovulgaris Т-54-
-
Разработаны схемы выделения индивидуальных аіи.Азр-специфичной и таолзэвисимой сериновой протеиназ Str.thermovulgaris Ф-54, основавшие на аффинной хроматографии.
-
Определены биохшчическяе и физико-химические характеристики гии,Азр-спэ циничной и ТИОЛ38ЕЙСИМОЙ сериновой протеиназ str. thei— movulgaria Т-54.
Полученные результаты в сочетании с данными других авторов указывают на достаточно широкое распространение у микроорганизмов особой группы аіи.Азр-специфичннх протеиназ.
Практическая ценность работы.
I. Разработаны схемы очистки аіи,А.зр-специфичной и тиолзависимой сериновой протеиназ Str.thermovulgaris Т-54.
7,. Выделенная 01и,А.зр-слецифжчная протеиназа, обладающая весьма узкой специфичностью, может бить использована для гидролиза белков при изучении их первичной структуры (вместо протеиназы золотистого стафилококка S.aureus V8).
3. Выделенная нами' тиолзависимая сершювая протеиназа str.thermovulgaris аналогична по свойствам протеиназе Th.vulgaris и перспективна для изготовления стиральных порошков, дрожжевых гидролизатов и т.п.
Публикации и апробация работы. По теме диссертация опубликовано 6 печатных работ. Материалы диссертационной работы обсуждались на V Всесоюзной конференцій по теории ферментативного катализа (Москва, 1987) и IV Всесоюной конференции "Виосинтез ферментов микроорганизмами" (Ташкент, 1988).
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзоре, обсуждения результатов работы, экспериментальной части, выводов и списка литературы, включапдего 283 ссылки. Работа изложена на 152 страницах машинописного текста и содержит 17 рисунков и 2jf таблицы.