Введение к работе
Актуальность проблемы. Современные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что фосфорилирование легких цепей-2 (ЛЦ-2) миозина влияет на структуру тяжелых цепей (ТЦ) миозина, модифицируя взаимодействие актина с миозином. В отличие от гладких мышц фосфорилирование ЛЦ миозипа сердца и скелетних мышц позвоночных животных не является необходимым условием для обеспечения взаимодействия миозипа с актином. Однако в последние годы было обнаружено, что структура комплекса актипа с тяжелым меромиозипом зависит от степени фосфорилирования ЛЦ-2 миозина (Strepkowski D., 1-985).
До сих пор остается спорным вопрос о влиянии фосфорилирования ЛЦ на связывание Са^+ с миозином. Одни авторы (Michael J., 1979) указывают на то, что фосфорилирование ЛЦ-2 миозина не влияет на связывание Са^+ с миозином, а другие - повышение концентрации' свободного Са в перфузате до 5мМ снижает скорость включения Pj в ЛЦ-2 миозина предсердий (Herring В., 1986).
С другой стороны, показано, что инкубация миофпбрилл сердца в присутствии: киназы'ЛЦ миозина приводит к 50%-80%-ному фосфорилировапию миозина, АТФазпая же активность при этом не изменяется (Franks К., 1984). Но доказательство роли фосфорилирования как модулятора сокращения миокарда остается сомнительным (Gevers W., 1984). С этой целью необходимо выяснение роли фосфорилирования ЛЦ-2 миозина сердца в регуляции актип-миозинового взаимодействия, особенно при сердечнососудистой патологии, а также фармакологической коррекции этого взаимодействия.
Цель и задачи исследования. В работе была поставлена цель: сравнить степень фосфорилирования ЛЦ-2, миозина из разных отделов сердца человека (аутопсический материал) н животных. Исследогтть влияние фосфорилирования ЛЦ-2
миозина да регуляцию актин-миозипового взаимодействия при патологии и фармакологическая коррекция этого взаимодействия некоторыми кардиоактивпыми препаратами. В работе были поставлены следующие конкретные задачи:
1. Изучить степень фосфорилирования ЛЦ-2 миозина в
разных отделах сердца человека и животных:
а) в контрольной группе животных
б) у животных с экспериментальным инфарктом миокарда
в) в сердце человека (аутопсия)
-
Изучить взаимосвязь между АТФазной активностью и степенью фосфорилирования ЛЦ-2 миозина, а также их зависимость от изоферментного спектра миозина в разных отделах сердца человека.
-
Изучить влияние кардиоактивпых препаратов на степень фосфорилирования ЛЦ-2 миозипа и АТФазпую активность миокарда крыс в опытах ід vivo и in vitro.
Научная новизна и практическая значимость работы. Из разных отделов сердца человека (аутопсия) выделен и исследован изоэнзимпый спектр миозина и актомиозина. Отмечена гетерогенность как в разных отделах сердца, так и у разных лиц при одной и той же патологии, т.е. отмечалпсь индивидуальные различия.
Впервые была исследована взаимосвязь между степенью фосфорилирования ЛЦ-2 и АТФазной активностью миозина разных отделов сердца человека и животных. Показано, что при сердечно-сосудистых заболеваниях снижается степень фосфорилирования ЛЦ-2, что сопровождается снижением АТФазной активности миозина.
Впервые установлено влияние кардиоактивных средств
на фосфорилирование ЛЦ-2 миозина, доказано, что В-
блокаторы способны изменять степень фосфорилирования
ЛЦ2 миозина сердца. ,
На основании предложенного исследования иолучепы новые данные о молекулярных механизмах нарушения сократительной функции миокарда у человека. Результаты позволят в будущем разработать новые подходы в терапии недостаточности сердца.
Аггробания работы. Результаты работы докладывались:
на VIII Всесоюзном симпозиуме "Биофизика и биохимия
биологической подвижности", г. Тбилиси,. 1987г., на
Международном симпозиуме "Молекулярная организация
биологических систем", г.Москва, 1989, на III Респуб. конф.
"Достижение физико-химической биологии ' и
биотехнологии", г. Ереван, 1989, на VI Всесоюзной конференции по биохимии мыщц, г. Тбилиси,- 1989, на К Всесоюзном симпозиуме "Биофизика и биохимия биологической подвижности (мышечное сокращение)", г. Тбилиси, 1990г., на I Международном конгрессе по терапии мышц, Италия, г. Сорепто, 1991.
Работа апробирована на заседании Ученого совета Института кардиологии МЗ РА от 29 марта 1995г и па заседании кафедры биохимии биологического факультета Еревапского государственного университета от 15 мая 1995г.
По материалам диссертации имеется 9 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Днсссртациоппая работа состоит из введения, обзора литературы, материалов' и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 128 страницах машинописного текста, содержит 23 рисунка и ? таблиц. Библиография включает 201 наименование.