Биохимические основы фармакологических свойств метилкобаламина Цукерман, Елена Самарьевна

Введение к работе

. Актуальность, темы. Среди известных витаминов, коферментов и их троизводных витамин В₁₂ отличается большим разнообразием своих би-эхимических функций. Несомненно, что такая полифункциональность витамина В₁₂ связана с его уникальной химической структурой: он принадлежит к координационным соединениям кобальта, отличающимся своей реакционной способностью. В настоящее время известны две ко-їерментнне формы витамина В₁₂ - метилкобаламин (МеСЫ) и аденозил-кобаламин (AdoObl). AdoObl является коферментом метилмалокил-КоА-мутазы, МеСЫ - коферментом метионинсинтетазы, вовлеченной в синтез' метионина. Т.о. МеСЫ участвует в многочисленных реакциях метилирования в организме млекопитающих. Возможно также, что МеСЫ ыогет сам выступать в роли метилирующего агента (Phohi-Leszkovioz A., et'al, 1991). О момента открытия коферментных форм витамина В₁₂ внимание исследователей привлекала возможность их использования в качестве лечебных препаратов. Первой коферментной" формой витамина, нашедшей применение в качестве средства метаболической терапии, был AdoCbl. Исследования, касающиеся возможного применения МеСЫ в качестве терапевтического средства, в основном, проводились в Японии, и в настоящее время МеСЫ используется в этой стране в качестве лечебного препарата при диабете, различных неврологических симптомах и некоторых других заболеваниях. В нашей стране МеСЫ был синтезирован в НПО "Витамины" под руководством профессора А.Ы. Юркевнча. В сбязи с этим возникла необходимость изучения этого коферментного препарата в качестве потенциального лекарственного средства. Учитывая, что к этому времени в стране выпускалось уже 3 препарата на основе витамина В₁₂ (цианкобаламин, снсы; оксикобаламин, ОНСЫ, и AdoCbl), особое внимание мы уделили доказательству либо преимуществ мвсы в сравнении С АйоСЫ, либо поиску других областей возможного применения Иесы в'лечебной практике. Самостоятельный интерес представляло изучение спектра индивидуальных форм кобаламиков при ряде патологических процессов и возможности коррекции возникающих нарушений с помощью Месы и AdoObl. Эти данные позволили бы обосновать выбор той или иной коферментной формы витамина Bj₂ как лекарственного средства. Принимая во внимание вовл{:Ч2кие витамина Bj₂ в поддержание статуса восстановленных SH-групп, представлялось актуальным изучение возможных нарушении со сторонъ некоторых компонентов глутатионовой системы при ряде патологических состояний и влияния на них МеСЫ.

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось акспериментальное обоснование использования lleCbl как лекарственного средства с помощью биохимических методов исследования. Для достижения 8ТОИ цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить характер изменении со стороны кроветворения и обмена кобаламинов при анемии, вызванной введением фекилгидразина (ФГ). и возможность коррекции обнаруженных нарушений с помощью МеСЫ.

2. Виявить изменения в обмене кобаламинов и состоянии некоторых компонентов глутатионовой системы (уровень общих и небелковых БН-групп, активности глутатионтрансферазы и глутатионредуктазы) в условиях белково-холиновой недостаточное у крыс и изучить возможность коррекции нарушений, возникающих при етой патологии с помощью МеСЫ.

3. Изучить возмокное гепатопротекторное действие МеСЫ на модели токсического гепатита, вызванного галактозамином (ГА).

4. Изучить потенциальную противовоспалительную активность ЫеСЫ, влияние его на спектр индивидуальных форм кобаламинов в крови и внутренних органах, а также состояние де токсициру ще а функции печени при адыовантном артрите (АА) у крыс.

5. Провести изучение фармакокинетики UeCbi в сравнении с другцвд формами витамина Bj₂.

. Выбор моделей патологических состояний определялся участие» Несы в обмене веществ. Большинство исследований проводилось I сравнении с айосы для выяснения возможных отличий в действии 8ТШ двух коферментных форм витамина В₁₂«

Научная новизна. Впервые изучен спектр ивдиввдуалышх форм кобаламинов в крови и органах экспериментальных животных при гепатита различной этиологии, ФГ-анемии и АА, что позволило выявить наруше кия в обмене кобаламинов при этих видах патмюгии. Установлено что в большинстве случаев в крови животных развивался дефици Иасы. показано, что только Месы (но не AdoObl) нормализуе спектр индивидуальных форм кобаламинов при отравлении кроликов ФГ ГА-гепатите и белково-холиновой недостаточности у крыс Впервы изучено состояние некоторых компонентов глутатионовой системы пе чеки при ГА-гепатите и АА. Показано, что МоСЫ способствует пол держанию статуса вн-групп при белково-холиноюй недостаточности ГА-гепатите. Установлено, что ЫоОЫ предотвращает снижение актив ности глутатионтрансферазы при белково-холиноіюй недостаточности активности глутатионредуктазы при ГА-гепатите и АА. Проведено ерг вііительное изучение, фармакокинетики МаОЫ, AdoCbl, ОНСЫ и CNOW

позволившеє выявить определенные закономерности фармакокинетичес-. кого поведения этих кобаламинов к рассчитать их основные фармако-кинетические параметры.

Научно-практическая значимость. Проведенные исследования показали, что изучение спектра индивидуальных форм кобаламинов в крови и органах экспериментальных животных позволяет выявить нарушения в обмене витамина В^. тогда как определение только общего содержания кобаламинов малоинформативно. При клиническом использовании препаратов на основа витамина В,₂ необходимо учитывать специфику нарушений в обмене кобаламинов при разных видах патологии и применять ту форму витамина, в которой больной организм нуждается прежде всего.

На основании обнаруженной у МеСЫ противовоспалительной активности при ДА, а также способности препарата поддерживать на нормальном уровне обмен кобаламинов и систему биотрансформации ксеноби-отикоз (детоксицирующую функцию печени) получено разрешение Фарм-комитета { протокол N 10 от 30 мая 1990 г ) на клинические испытания препарата в комплексной терапии ревматоидных артритов у человека. Аналогичное разрешение (протокол н 10 от 10 июля 1991 г) получено на клинические испытания МсСЫ как гепатопротектора. Соответствующие материалы представлены в Фармкомитет для получения разрешения на клинические испытания МеСЫ в гематологии.

Положения, выносимые на защиту.

6. Изучеіше спектра индивидуальных форм кобаламинов при различных видах экспериментальной патологии: ФГ-знемии, АА, гепатитах различной'этиологии позволяет выявить определенные нарушения в обмене кобаламинов в организме животных.

7. Развитие ФГ-анемии, белково-холиновоЯ недостаточности, ГА-гепатита и АЛ сопровождаются нарушением функционирования глутатио-иовой системы печени ответных, которое мо-кет быть предотвращено введением НеСЫ.

. 3. Месы'оказывает нормализующее действие на процессы кроветворения при ФГ-анемии.

4. месы обладает гепатопротеэтопнямн свойствами при остром ГА-ггпатите.

5. Обе коферментнне формы витамина В_1?~ Ие.сьх и AdoCbi обладают противовоспалительной активностью при АД у крыс, причем МеСЫ в этом отношении более аффективен. Месы способствует поддержанию детоксицирукщей функции печени, нарушающейся при этом патологическом процессе.

6.- Каждая из четырех физиологически активных форм вита.«шг3_1й.

имеет индивидуальные особенности фармакокинетического поведения. Определены основные фармакокинетические параметры МеСМ. Апробация. Результаты работы были доложены на конференции молодых ученых и специалистов "Актуальные вопросы экспериментальной и теоретической медицины" (Одесса, 1986), 2-й Всесоюзной конференции по фармакокинетике (Каунас, 1987), 19-й конференции ФЕБО (Рим, 1989) VII Биохимической конференции Прибалтийских республик (Каунас, 1990), Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология" (Москва, 1991), Симпозиуме «Витамины и здоровье" (Москва, 1993). Публикации. По материалам диссертации опубликовано II печатан

работ.

структура и объем диссертации. Диссертация состоит и& введения,