Введение к работе
Актуальность проблемы. Т л^шналлез является одной из важных паразитарных болезней человека и .тавотных и распространен почти повсеместно. Исследования по трихинеллезу ведутся ЕО многих странах мира. С 1958г. их координирует Международная трихи-неллезная комиссия.
В последние годы достигнуто определенные успехи по вопросам систематики я биологии трнгоінслл (Гаркава 5.JT., І9Б5; Бессонов А.С, 1981,1988: Бритов З.А., Хомутова Т.Н., 1992; Нагоршй С.А., 1985, 1989; Романова Е.А., 1992; Mcumoto S. et al., 1988; Рогіо е. et al., 1989; Albarran E. et al.,1990). Разработаны новые методы п средства специфической диагностики трихинеллеза (Полетаева О.Г. и др., 1988: 1990;Chaa д.Я.. Ко Roland С, 1988; Chapa-Ruia M,R, et al, ,1989), эффективные схемы лечения данного заболевания в зависимости от многообразных клинических проявлений (Клейн Ю.С,, 7S-0; Озерецковская Н.Н., 1988, 1932; Пероверзева З.Б., 1988; Kociocka W. et al., 1990).
По тяжести клинического течения, осложнениям, числу леталь-ннх исходов, трихинеллез может быть отнесен к группе наиболее опасныхпаразитарных заболеваний. Патогенез трихинеллеза складывается из трех основных стадий: кишечной, миграционной и мышечной (Озерецкозская Н.Н,, 1978). Многообразие клинических проявлений трихинеллеза связивают с высокий "уровней патогенное ти" Triohinella
spiralis. в связи с чем, данный гельминт отнесен к наиболее патогенным видам в гельминтологии (Астафьев Б.Л,, 1975, 1989). Тр^хилолли обладает мещлл:.; секси'ллпзпру'хрім фактором, слособ-лостыо к массовому ох^оьденяю ллчинок в кишечнике хозяина и поражения значительного числа видов животных и человека. Указанные факторы остаются биохимически я пмчупологпчески нецденти^лцпро-глнпыпп. Не изучены механізми, обеспечивающие прикрепление трк-хлнзлл к соответствующим морфологическим структурам макроорганизма, их проникновение во в я" тре гни:') среду оргагазма, интоксикация п другие проявления болезни.
Прямые доказательства наличия-отих факторов у трихинелл ог
раничиваются выявлением у них фермента гпалуронядазн, баз'деталь
ного изучения се поЕрсцдаацего действия. '
Заявление а изучение биохимической прароді* различных, ^аі:торов латогонпостя трихинелл, определение воду^их факторов, сг:ет~ отаенных га адгезия, проницаемость, токсичность, ' возмогло, кадягт.тг новио подходы ?. поиску отмеренных орздетг лечения трихинеллеза
_ 4 -
и помогут при разработке новых'биохимических или иммунологических тестов диагностирования данного заболевания.
Цель к задачі! -доследования,. Цель настоящего исследования: выявить и дать биохимическую характеристику биологически активным макромолекулам (БАМ) трихинелл, ответственным за их патогенное м> и определить пути совершенствования диагностики трихинеллеза на основе выявленных факторов патогенности.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
стандартизировать методы выделения и концентрирования новорожденных и инвазионных личинок, половозрелых особей трихинелл;
разработать и стандартизировать метод получения белкового экстракта из гомогенатов трихинелл разных стадий развития;
изучить.белковый спектр трихинелл (инвазионные и новорожденные личинки^ половозрелые особи) на примере "эталонных" штаммов и местных природных изолятов;
выявить и охарактеризовать адгезивную активность (адгезины, лек-тины-геыаггдютяяины), факторы проницаемости (гяалуронддаз'а), нейраминидаза) и токсичности т. epiralls раЗШХ стадий развития;
разработать и дать оценку специфичности и чувствительности методов диагностики трихинеллеза, основанных на использовании выявленных факторов патогенности трихинелл.
Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые у нематоды вида Triohinella epiralls обнаружены биологически-активные макромолекулы (нейраыиявдаза, гемагглютинин, гемолизин, цитотоксины). Подтверждено наличие гиалуронидазы и определена ее активность как для кутикуляряых, так и водорастворимых белков трихинелл. Дана молекуляряо-бяологяческая характеристика гемагглютя-нина трихинелл и определена молекулярная масса остальных выявлена биомолекул. Среди растворимых белков трихинелл особый интерес представляет группа белков с и.м. 36-38кДа, обладающих гемолитической, гемагглютинпруищей и цитотоксической активностью.
Наличие выявленных активных бпомолёкул в организме трихинелл можно связать с участием их в процессе возникновения и развития данного заболевания,, т.е. охарактеризовать как бакторы патогенности. Данные (факторы патогенности обнаружены у инвазионных личинок и половозрелых особей и не выявлены у новорожденных личинок ' трихинелл.
Выявленные гемагглютднан л цитотоксины траханолл обладают ан-тпгенкоетьэ. Показана принципиальная:возможность использования
очищенных препаратов гемагглгагиппна грихіїгюлл для серологической
диагностики данного-заболевашія.
Практическая значимость. Стандартизированы методы выделения и концентрирования личинок я половозрелых особеії трихинелл, разработан оптимальны."; метод получения белкового экстракта из гомоге-натов т,у::хпнолл разных стадия развития. Данные метода рекомендованії к использовании в научно-исследовательских учреждениях гельминтологического про'ядя. На основании анализа белкового спектра трихинелл^ виявлену белки, присущие о-ределенноЛ стадии их развития, что открытие? возможность их. пріі>.іонеяия в диагностических иелях.
Выявление антигенных свойств .7 некоторых "акторов патогенності! трихинелл, в частности, у гемагглютпшша, позволяло использовать ого в реакции тормояонпя гемагглатяпацин для обнаружения специфических антител ft сиворотке крови больных трихинеллезом. Полученные знания о наличии и природе факторов патогенное ти у трихинелл открывааг новые подходи к изучению, диагностике, лечению и Поиску новых .фармакологических средств при трихинеллезе.
Положения., выпоспмие .ча защиту:
- разработка и применение ста.чдартязированішх методов исследова
ния трихинелл, позголпвгл:х получить сопоставимые данные по ха
рактеристико белков различных стсглоб и фаз развития;
-- разработка методики отрохуіския оплодотворенными самками личинок трихинелл in vitro . дачцеґ; возможность получать максимальный выход биомассы в первые часы культивирования;
выявление общности белкового состава "эталонных" штаммов и местных, географически удаленных изолятов трихпиолд при использовании метода детергентного электрофореза. У трех стада;" развития Т. яР1га11а(нозороздешке, инвазионные лячяякя( половозрелые особи) установлено ііалячие обдпх и- стадпоспецифических белков;
впервые в составе водорастворимых а кутлкулярных белков половозрелых особей и инвазионных личинок т. spiralis выявлено наличие гемагглютияина, недрамянядазы, гемолизина, шітотокскпов - факторов иагогенности;
установлено наличие антигенных свойств у гемагглзтяяпяаи пяте— токсинов инвазионных личинок и половозрелых особей трп;'_чнелл.
Апробация, работы. матернаяг диссертации долозеяы яа симпозиуме АН СССР "Закторы регуляции популяилопных процессов 7 гель-таятов" (г.Пудияо, 1990), на 5-й я 6-й Зсессэзнкх конференция?: по іробг.ехе человека и у.пеотяых (г.Ковочоркасск, 1288; г.Кпр'эз.-ЭЗг).
Диссертационная работа апробирована на заседании: научно-производственного Совета "Паразитарные болезни человека" ГО СЭН РФ, научном Совете НПО "Биопрепарат",
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных рабоа получена приоритетная спраіЗка на предполагаемое изобретениеТе-маггуготияирущий антиген нематоды ifrichinella spiralis" от 29.04.92 г. .'5 5040403.'
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на УОЇ страницах машинописного текста и состоит из введения, четпрех глав, включающих литературную справку а собственные ясследоваїшя (материалы и методы, результаты и их обсуздение), заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения и указателя литературы. Работа иллюстрирована 5 таблицами и 13 рисунками. Библиографический указатель содержит 132 источника литературы (70 отечественных и 2 иностранных). Цифровой материал диссертации обработан методами вариационной статистики.