Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Условия и методика исследований, исходный материал
1.1. Характеристика почвенно-климатических условий Ленинградской области 7-9
1.2. Исходный материал 9 - 10
1.3. Методика исследований 10-17
1.3.1. Методика полевого опыта 10 - II
1.3.2. Методы биохимических исследований II - 17
ГЛАВА 2. Биохимическая характеристика сортов клевера лугового
2.1. Обзор литературы 17 - 33
2.2. Экспериментальная часть 34-79
2.2.1. Содержание питательных веществ в зеленой массе сортов культуры 34-44
2.2.2. Содержание пластидных пигментов в зеленой массе сортов культуры 44-55
2.2.3. Состав и содержание эстрогенных изофлавонов в зеленой массе сортов культуры 55-67
2.2.4. Корреляционная зависимость между различными химическими компонентами в зеленой массе клевера лугового ... 67 - 77
2.2.5. Заключение к главе 2 77-79
ГЛАВА 3. Динамика питательных и биологически активных веществ в отдельных органах и целом растении сортов клевера лугового в онтогенезе .
3.1; Обзор литературы . 80-89
3.2. Экспериментальная часть 90 - 162
3.2.1. Динамика содержания сухого вещества, сахара,
сырого белка, золы и аскорбиновой кислоты- 90 - 112
3.2.1.1. Изменчивость химического состава надземных органов сортов клевера лугового первого года жизни 91-95
3.2.1.2. Изменчивость химического состава надземных органов сортов культуры на второй год жизни 95-103
3.2.1.3. Изменчивость химического состава надземных органов сортов культуры на третий год жизни 103 - 109
3.2.1.4. Влияние года посева на содержание питательных веществ и их изменчивость в онтогенезе надземных органов сортов культуры . 109 - 112
3.2.2. Изменчивость пластидных пигментов 112 -136
3.2.2.1. Изменчивость пластидных пигментов зеленой массы сортов клевера лугового первого года
жизни . 114 - 118
3.2.2.2. Изменчивость пластидных пигментов зеленой массы сортов культуры на второй год жизни .119 - 126
3.2.2.3. Изменчивость пластидных-пигментов зеленой массы сортов культуры третьего года жизни .126 - 132
3.2.2.4. Изменчивость пластидных пигментов в зависимости от года посева . 132 - 136
3.2.3. Динамика эстрогеиных изофлавонов 136 - 162
3.2.3.1. Характеристика различных-органов и-целых растений клевера лугового по составу изофлавонов 136 - 144
3.2.3.2. Изменчивость изофлавонов сортов клевера лугового первого года жизни 144 - 147
3.2.3.3. Изменчивость изофлавонов сортов культуры второго года жизни 148 - 151
3.2.3.4. Изменчивость изофлавонов сортов клевера лугового третьего года жизни 151 -156
3.2.3.5. Изменчивость содержания эстрогенных изофлавонов в зависимости от года посева 156 - 160
3.2.4. Заключение к главе 3 160 - 162
Общие заключения 163-166
Выводы 167-169
Рекомендации производству 170 - 171
Литература 172-197
Приложения .' 198-258
- Методика полевого опыта
- Корреляционная зависимость между различными химическими компонентами в зеленой массе клевера лугового
- Изменчивость химического состава надземных органов сортов культуры на третий год жизни
- Изменчивость изофлавонов сортов клевера лугового третьего года жизни
Введение к работе
В Продовольственной программе СССР на период до 1990 года, принятой на Майском / 1982 г/ Пленуме ЦК КПСС отмечается: "Особое внимание уделять обеспечению сбалансированности кормов по белку и другим компонентам, улучшению качества, рациональному использованию и сокращению потерь кормов " / I /. В решении поставленной проблемы важная роль принадлежит селекции, проводимой с учетом биохимических особенностей исходного материала.
В условиях Нечерноземной зоны, в частности в Ленинградской области, для успешного развития селекционных работ на повышение качества зеленой массы сортов этой культуры требуется исходный материал с высокими биохимическими показателями. Кроме того, в этих условиях сорта клевера лугового мало изучены в отношении изменчивости биологически активных веществ. Например, несмотря на исключительно важное значение хлорофиллов в процессе фотосинтеза и общности его строения с гемоглобином, каротиноидами и некоторыми витаминами /46, 58, 119, 128, 237, 238/ роль этих соединений в кормовых рационах животных пока совершенно не учитывается, а их количественное содержание у сортов клевера лугового почти не изучено. Отсутствуют данные по качественному составу и количественному содержанию эстрогенных изофлавонов в растениях коллекционных образцов этой культуры. Между тем известно, что изофлавоны, особенно биоханин А и формойонетин, в большом количестве оказывают вредное влияние на воспроизводительную способность животных / 144, 187, 193, 208, 210, 215 /, ингибируют рост самих растений, снижают их устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды / 81, 123, 124 /. Однако, эти вещества в определенном количестве нормализуют липидный, азотистый и углеводный обмен в организме животного и растений, способствуют нормальному функционированию органов размно - 5 жения, увеличивают мясную и молочную продуктивности скота / 25, 47, 61, 184, 223, 225, 232, 233 /.
Малоизученной является также проблема изменчивости содержания пластидных пигментов и изофлавонов в зависимости от сортовых особенностей, возраста, фазы развития, погодных условий и т.д.
Работа выполнена по проблеме 0.5I.I04.0I.03.H б., номер государственной регистрации 01.82. 0084782.
Цель и задачи исследования.В задачу наших исследований входило:
1. Дать биохимическую характеристику перспективных сортов клевера лугового из мировой коллекции ВИР в условиях Ленинградской области с целью выделения лучших по качеству;
2. Выяснить характер изменчивости химического состава надземной массы клевера лугового в онтогенезе для выявления оптимальных сроков использования;
3. Модифицировать метод и определить содержание эстрогенных изофлавонов в зеленой массе этой культуры с целью отбора сортов, перспективных для селекции;
4. Изучить распределение биологически активных веществ по органам растений - листьям, стеблям, соцветиям (бутоны и цветки) -в разные фазы вегетации для выяснения их роли в метаболизме растения.
Научная новизна работы, ее практическая и теоретическая значимость. Впервые в условиях Ленинградской области коллекционные образцы клевера лугового разного географического происхождения оценены по концентрации пластидных пигментов и эстрогенных изофлавонов с целью выявления наиболее перспективных сортов в связи с использованием их на зеленый корм, сено и в производстве травяной муки. Изучен характер изменчивости качественного состава и коли _ б чественного содержания биологически активных веществ в надземных органах сортов, отличающихся по скороспелости, в зависимости от фазы развития и возраста для установления оптимальных сроков использования зеленой массы и с целью выяснения роли этих соединений в метаболизме. Выявлена корреляционная зависимость между величиной соотношения хлорофиллов а и б степенью зимостойкости растений. Также показана коррелятивная связь между различными компонентами химического состава зеленой массы сортов клевера лугового. На основе ранее (172, 192) модифицирован метод количественного определения эстрогенных изофлавонов.
Выделенные нами перспективные сорта с высоким содержанием сырого белка, пластидных пигментов и низким количеством фитоэстрогенов уже используются как исходный материал в различных селекционных целях Северо-Западного научно-исследовательского института сельского хозяйства, Уральского научно-исследовательского института сельского хозяйства и других учреждениях страны.
Результаты исследований расширяют представления об локализации и изменчивости биологически активных веществ в процессе роста и развития растений. Полученные данные могут служить основой для использования клевера лугового в качестве источника ценных биологически активных веществ в разных ботанических и клинических исследованиях.
Экспериментальная работа по теме диссертации выполнена в отделе .биохимии и биохимической лаборатории Павловской опытной станции ВИР в период аспирантской подготовки 1980 - 1982 гг. под руководством кандидатов биологических наук Г.Б.Самородовой-Бианки и Н.А. Мухиной, которым автор выражает глубокую благодарность за ценные указания и советы при выполнении данной работы.
Методика полевого опыта
Статистическая обработка результатов осуществлена по среднему квадратическому отклонению ( S ) и его ошибке (Sx )f коэффициенту вариации ( V ), критерию существенности разности ( ) и по уравнению линейной парной корреляции (г+ Sr ) ( 48,55 ) с использованием ЭВМ и Электроника " 100/25 в группе по математической обработке данных в ВИРе.
1.3. Методика исследований I.3.I. Методика полевого опыта Посев клевера лугового в коллекционных питомниках проведен сплошным рядовым способом, с междурядиями 20 см. Площадь делянки 1,5 м , повторность двукратная. Стандарт высевали через 8 образцов. Норма высева семян клевера лугового 2 г/м . В качестве стандарта в 1979 г. были взяты сорт Сиворицкий 416, а в 1980 г. сорта Сиворицкий 416 и Суйдинец.
С целью изучения динамики химических веществ в онтогенезе клеве р ре лугового опыт проводился на делянках 1,5 м , в трех- и четырехкратной повторности. Закладка питомника коллекционных образцов клевера лугового и - її уход за ними осуществляли согласно методике, принятой в отделе кормовых культур ВИР (60). 1#3.2. Методы биохимических исследований Полевую пробу зеленой массы 0,8-1,5 кг отбирали в утренние часы (в ясную погоду) и сразу анализировали в лаборатории. В этой пробе определяли весовые соотношения листьев, стеблей, генеративных органов. Определение содержания сухого вещества, суммы Сахаров, аскорбиновой кислоты, пластидных пигментов проводили в свежем материале. Часть пробы после измельчения размещали в эмалированные кюветы и высушивали в термостате сначала при І20С в течение 30 мин, (чтобы прекратить деятельность ферментов в срезанных растениях), затем при 60-80С в течение ночи. Высушенный материал измельчали до тонкого помола, затем в нем определяли содержание сырого белка и золы.
Изофлавоны изучали в лиофилизированном материале. С этой целью из зеленой массы полевой пробы брали две навески по 5 г и высушивали в вакуумном аппарате лиофильной сушки КС-30 ЧССР по следующей схеме: I и II сутки - 30С; III и 17 сутки - 20С, У и УІ сутки - І5С; УІІ сутки - І0С; УІІІ и IX сутки - 5С; X сутки -+ 20С
Анализ общего химического состава проводили согласно методикам, принятым в отделе биохимии ВИР (50). Содержание сухого вещества определяли высушиванием навески в термостате при 105С до постоянного веса. Долю азота в материале определяли по Къелдалю (полумик-рометод), и умножая на коэффициент пересчета 6,25, вычисляли содержание сырого белка. Золу определяли весовым методом путем сжигания навески в муфеле при температуре до 600С. Содержание аскорбиновой кислоты в зеленой массе анализировали путем титрования экстракта растений краской - 2,6-дихлорфенолиндофенолом (реакция Тилвманса).
Массовую доля хлорофиллов а и б в зеленой массе определяли по методу А.А.Шлыка (157) в 100$-ном ацетоне при длине волн 662 и вЩ нм (СФ-І6). Каротин и сумму лютеина и виолаксантина в зеленой массе образцов анализировали хроматографически на бумаге 81 "Ленинградской быстрой" в системе петролейний эфир-ацетон -6:1 (22). Изофла-воны определяли по методике Бека (А.В.Веск, 172)., Френсиса и Мил-лингтона ( Francis c.M.,MHling on A.J92) в нашей модификации:навеску лиофилизированного материала (соответствующую 5 г свежего), растирали с добавлением стекляного песка и небольшого количества 80-ного этанола. Полученную однородную массу многократно промывали на воронке Бюхнера спиртом этой же концентрации, затем остаток переносили в колбу и кипятили со спиртом в течение 5 мин,фильтровали на воронке Бюхнера, повторно экстрагировали 80-ным горячим этанолом до отсутствия желтого окрашивания с I5#NaOH . Общий объем экстракта составлял 150-250 мг. Время извлечения 25-30 мин.
С целью сравнения нашей модификации с известным методом (172), равные объемы экстракта концентрировали с добавлением 100-150 мг надсернокислого натрия на 100 сіг для разложения липофильных пигментов и без него до объема соответственно 10 и 5 мл. Ту часть экстракта, куда не был добавлен надсернокислый натрий, экстрагировали для удаления хлорофиллов и каротиноидов петролейным эфиром / согласно методики А.Б.Бека, 172, С.М.Френсиса и А.И.Миллингтона,192/, следы которого удаляли затем легким подогревом под вакуумом, а ос 3 таток растворяли в 10-15 см этанола.
Как правило, изофлавоны находятся в растениях клевера лугового в виде гликозидов, и исследование их в такой форме затруднительно из-за плохого разделения на тонком слое силикагеля. Поэтому мы переводили эти соединения в дегликозидированные формы путем гидролиза концентрированных, очищенных от липофильных веществ остатков с 10 см3 в течение трех часов при 90-100С. Агликоны извлекали з из гидролизата этилацетатом 3-4 порции по 2 см .
Хроматографическое: разделение изофлавонов. Наиболее удобным сорбентом для разделения изофлавонов является тонкий слой силика-геля (12, 68). Из описанных разными авторами (172, 192, 195, 198, 207, 239) систем растворителей мы испытали более 20 и остановились на смеси I - хлороформ-этанол /3:1/ (12) и предложенной нами системе II - хлороформ - этанол / 4:1/.
В работе использовали готовые пластинки силикагеля марки "Си-луфол - УФ-254" / 15 х 15 см/, которые перед употреблением 2-3 раза промывали метанолом, а затем высушивали и активизировали при І20С в течение 30 мин. Каждую пластинку разделяли на 5 полос,экстракт наносили на 4 полосы в количестве 0,01-0,04 оьг (одну оставляли в качестве контроля), затем помещали строго вертикально в хроматографические сосуды (5=15 см, 1 =20 см). После подъема сис-; темы растворителей на высоту 11-12 см, пластинки вынимали, высушивали и просматривали в УФ-свете в парах аішиака. В этих условиях изофлавоны формононетин и дайдзеии обнаруживаются по своеобразной бело-голубой флуоресценции, а пятна, имеющие темно-желтую окраску, соответствуют биоханину А и генистеину и проявляются после опрыскивания растворами 2 % EeCl, или свежеприготовленной динитросуль-фофенолкислойой и различаются по оранжевой или пурпурно-коричневой окраске (172, 198, таблІ.І). Идентификация изофлавонов биоха-нина А и генистеина проводилась также путем сравнения с достоверными образцами, любезно предоставленными проф. М.Н. Запрометовым и В.А.Бандюковой. Сравнительные данные по величине достоверных образцов и изофлавонов клевера лугового представлены в таблице 1.2.
Корреляционная зависимость между различными химическими компонентами в зеленой массе клевера лугового
Известно, что зависимости, выявляемые фенотипическими корреляциями используются при отборе сортов кормовых культур (108, 136, 216). Для выявления перспектив селекции клевера лугового на качество и обоснования правильности распределения сортов, различающихся по скороспелости, по группам мы провели прямолинейный корреляционный анализ экспериментальных данных (средние за 1980 -1982 гг.) с использованием ЭВМ "Электроника" 100-25.
Результаты корреляционного анализа позволили выявить связи между различными химическими компонентами зеленой массы сортов клевера лугового ( п = 47 образцов, посев 1980 г). Это - корреляционные зависимости между содержанием сухого вещества и сырого белка (г =0,48, Р 0,001), сырого белка и золы (0,56; Р 0,001), золы и сахара (-0,45; Р 0,001), хлорофилла а и хлорофилла б (0,65; Р О.001) каротина и ксантофиллов (0,77; Р : =0,001), аскорбиновой кислоты и генистеина ( 0,38; P rO.OI); аскорбиновой кислоты и ксантофиллов (0,37; Р 0,01), генистеина и суммы био-ханина А и формононетина (0,42; Р 0,01), генистеина и дайдзеина (0,40; Р 0,01), золы и суммы изофлавонов (0,42; Р 0,01), суммы хлорофиллов и каротина (0,35; Р .0,01) и т.д. (табл. 20, приложение и рис. 2.2). Выявление этих зависимостей на большом числе сортов свидетельствуют в известной мере об их генетической детерминированности. Наличие достоверной корреляции между различными пластидными пигментами и между отдельными изофлавонами подтверждает вывод о том, что каждая группа этих соединений в функциональном отношении представляет собой единую, взаимосвязанную систему (77, 80, 168, 243).
С научной точки зрения значительный интерес представляют впервые обнаруженные нами корреляции между содержанием аскорбиновой кислоты и генистеина, золы и суммы биоханина А и формононетина, золы и суммы изофлавонов. Найденная положительная взаимосвязь между содержанием золы и изофлавонов, по-видимому, объясняется образованием комплексов между зольными элементами и изофлавонов (35).
Статистическая обработка экспериментальных даиных,полученных на сортах посева 1980 г. выявила очень слабые отрицательные корреляционные связи между содержанием сырого белка и эстрогенных изо флавонов (в том числе биоханина А и формононетина) ( г=-0,041) (средние за 1980-1982гг.).
Анализ материала посева 1979 г. (12 сортов) позволил выявить дополнительные корреляционные связи (средние за 2 года). Так,показано отрицательная корреляция между содержанием сахара и некоторых биологически активных веществ. Выявление этих связей обусловлено, по-видимому, влиянием погодных условий, поскольку подобные связи не были обнаружены на сортах посева 1980 г. (табл. 19, прил., рис.2.3).
Существенная отрицательная корреляционная зависимость найдена также между содержанием сырого белка и суммы биоханина А и формононетина, суммы изофлавонов соответственно (-0,66+ 0,24; -0,61+ 0,25). Наличие высокой отрицательной корреляции между содержанием сырого белка и эстрогенных изофлавонов или отсутствие таковой между этими признаками открывает большую возможность перед селекционерами нашей страны для улучшения кормовых качеств клевера лугового, так как оказывается возможным вести селекцию этой культуры на повышенное содержание сырого белка при одновременном снижении количества эстрогенных изофлавонов.
Изменчивость химического состава надземных органов сортов культуры на третий год жизни
Специфика условий вегетационного периода в 1982 г. значительно сказалась на изменчивости содержания питательных веществ в надземных органах изученных сортов. Вегетационный период в 1982 г. по характеру погодных условий делился на три части: первая - период отрастания / третья декада апреля-мая/ характеризовалась низким количеством выпавших осадков /32,4 мм или в 1,9 раз ниже, чем средние шоголетние /, вторая-бутонизация и начало цветения/ июнь-первая декада июля / отмечалась равномерным выпадением осадков и этим создала неблагоприятные условия для завязывания генеративных органов; и третья - полное цветение / вторая и третья декада июля / характеризовалась чередованием засушливых и влажных периодов. Вторая декада июля отличалась необычно малым выпадением осадков / 2 мм или в II раз ниже, чем средние многолетние/ и повышенной температурой воздуха / 20,5С/. В конце июля увлажнение растений вновь улучшилось /таблЛ, прил. /.
В отличие от предыдущих лет, в листьях и в целом растении у среднераннего сорта Цудовны максимум накопления сухого вещества, сахара, сырого белка, золы и аскорбиновой кислоты наблюдался в период начало отрастание-бутонизация. С наступлением цветения питательные вещества значительно снижались. В фазу полного цветения в целом растении сорта Цудовны отмечалось повышение количества сухого вещества, сахара, сырого белка и золы / рис.3.8 и 3.10 /.
В стеблях динамика сухого вещества и сахара в первый и третий годы жизни оказалась сходной, хотя имелись значительные различия в изменчивости сырого белка, золы и аскорбиновой кислоты. В период начало отрастание-бутонизация в стеблях шло интенсивное накопление упомянутых веществ, переход к цветению сопровождался убылью содержания указанных веществ в стеблях, вызванный сложившимися погодными условиями, а также использованием их на процессы, связанные с формированием генеративных органов (рис.3.2, 3.3; 3,8 и 3.10).
Динамика сухого вещества, сахара, сырого белка и аскорбиновой кислоты в головках среднераннего сорта третьего года жизни аналогична второму году жизни, а изменчивость золы - первому году жизни.
Несмотря на неблагоприятные погодные условия для развития растений, которые затянули наступление фазы цветения у раннеспелого сорта, характер изменчивости.сухого вещества, сахара и аскорбиновой кислоты в зеленой массе.сорта Лиепсна остался таким же, как в предыдущие годы жизни / рис.3.6 и 3.10 /. Однако, обнаруживались отличия в динамике сырого бежа и золы у растений третьего года по сравнению с первым и вторым годами жизни. Так, максимум накопления сырого белка на третий год жизни у этого сорта отмечался в фазе кущения, а золы-в фазе бутонизации. К фазе начало цветения содержание их уменьшается. В конце цветения наблюдается повышение количества сырого белка и золы, как и у сорта Цудовны.
На третий год жизни значительно усилились сортовые различия между ранними и поздними образцами, что обусловлено еще и неблагоприятными погодными условиями третьего года вегетации.
Изменчивость содержания сухого вещества в листьях и стеблях, сухого вещества, золы и аскорбиновой кислоты в головках, сухого вещества и аскорбиновой кислоты в целом растении сорта Гибридный Aпозднеспелый второго и третьего года жизни сходно / рис.3.9 и
ЗЛО /. Однако, в остальных случаях отмечались значительные различия в динамике питательных веществ растений разного возраста. Это особенно заметно в изменчивости массовой доли сырого белка, сахара, золы и аскорбиновой кислоты в листьях и стеблях. Так, в период отрастание-бутонизация в листьях у позднеспелого сорта отмечается интенсивное накопление сырого белка с одновременным уменьшением в них количества сахара и золы. К фазе цветения в листьях значительно убывает содержание.сахара, сырого белка и отмечается некоторое повышение доли золы. Переход к полному цветению, сопровождается, заметным увеличением количества упомянутых веществ. Причиной повышенного содержания сахара и сырого белка в период полного цветения у этого сорта, очевидно может быть засушливая и жаркая погода, создавшая крайне неблагоприятные условия для использования этих веществ в процессах, связанных с вызреванием семян / 3 /.
Изменчивость изофлавонов сортов клевера лугового третьего года жизни
Динамика изученных изофлавонов в процессе .онтогенеза среднеран-него сорта Цудовны третьего года жизни несколько отличается от - 152 первого и второго / рис.3.17, 3.18 и 3.21 /. Хотя имелась и анало гия. Сходство заключается в том, что динамика биоханина А.и формо нонетина, генистеина, дайдзеина в листьях, генистеина в стеблях, биоханина А, формононетина и суммарного количества изофлавонов в соцветиях, биоханина А и формононетина в целом растении у сорта Цудовны разных лет жизни одинакова. В целом растении этого сорта характер изменчивости дайдзеина во второй и третий год жизни, а генистеина и суммарного, количества фитоэстрогенов в первый и третий год жизни также сходны. . .. Характерной особенностью стеблей сорта цудовны.третьего года жизни.является высокое накопление биоханина А и формононетина в фазе бутонизации и.полного цветения. Повышенное содержание указанных изофлавонов в стеблях в фазе бутонизации может быть объяснено перемещением этих веществ из листьев к точкам роста и к местам закладки генеративных органов. В дальнейшем, переход к цветению сопровождается уменьшением.количества.биоханина А и формононетина в стеблях с. параллельным повышением содержания их В-соцветиях. К массовому.цветению.вновь наблюдается возрастание массовой доли упомянутых изофлавонов в стеблях-при одновременном-снижении количества .их в головках.-Это, как отмечалось выше, вероятно,, связано с наличием,изобилия.исходных продуктов для биосинтеза данных веществ в этот период.
. Динамика дайдзеина в стеблях, в отличие.от предыдущих лет, в третий- год жизни растений характеризуется одновершинной кривой с максимумом в фазе начало цветения / 103 мг/100 г /. После этой фазы содержание его-резко падает. ......
Динамика суммарного количества фитоэстрогенов имеет несколько иной характер.по сравнению с отдельными.изофлавонами. В листьях и в целом растении у сорта Цудовны в период начало отрастание-на - 153 чало цветения идет неуклонное снижение количества упомянутых веществ. В дальнейшем, с наступлением массового цветения, этот процесс замедляется и доля фитоэстрогенов в листьях и в целом растении остается практически неизменной..
Влияние возраста растений и погодных условий на изменчивость эстрогенных.изофлавонов отмечалось и у раннеспелого сорта Лиеп-сна. В отличие от предыдущих лет, в зеленой массе.этого сорта в третий год жизни максимум количества отдельных изофлавонов приходится на начало отрастания, хотя тенденция, к повышению содержания биоханина А и формононетина в период бутонизация-начало цветения сохранилась и в этот год жизни / 538 - 223 - 525 мг/ЮОг/ / рис.3.20 /.
. Сопаставление данных по динамике изофлавонов за два года показывает, что в листьях и стеблях у сорта Гибридный позднеспелый ход изменчивости генистеина, биоханина А и формононетина до фазы начало цветения включительно в растениях разных лет жизни одинаковы. Переход к массовому, цветению / с .17 июля по 25 июля/ в третий ..год..жизни,сопровождается значительным повышением количества. . этих изофлавонов, которое могло быть вызвано последействием засухи, , испытанной, растениями в период формирования генеративных органов/ . табл.1, прил./.
Динамика.генистеина и суммарного содержания фитоэстрогенов.в. целом.растении в процессе онтогенеза у.позднеспелого сорта второго, и. третьего года, жизни аналогична. Изменчивость суммарного количества изофлавонов в листьяхи стеблях у этого сорта сходна с динамикой.биоханина А.и.формононетина. ..... . ...
В зависимости от.возраста растений и погодных.условий в динамике указанных веществ .значительные .изменения.происходят и в соцветиях. Максимум количества биоханина А и формононетина и суммы изофлавонов наблюдается в фазе бутонизации / соответственно 552 и 615,5 мг/100 г /. По мере развития растений их количество убывает. Наивысшее содержание генистеина в соцветиях приходится на фазу начало цветения /85,0 мг на 100 г /, а дайдзеина-на фазу полное цветение / рис.3.22 /..
Изучение изменчивости изофлавонов в надземных органах и в целом растении среднепоздних сортов показало, что возраст растений существенно сказывается на динамике упомянутых веществ. В отличие от. второго года, в листьях сорта Октябрь третьего года жизни максимум.количества биоханина А и формононетина приходится на начало цветения,, в.стеблях - на начало.отрастания, в соцветиях-на фазу бутонизации, затем снижается /рис.3.22 Д Характер динамики генистеина у сорта Октябрь разных лет жизни также отличается. В. изменчивости этого.изофлавона в листьях от мечалось два максимума: в фазе начало отрастания / 231 мг sa ЮОг/ и начала цветения/ 266 мг/100 г /. Содержание генистеина в стеб лях по мере развития растений снижается до фазы начала цветения. Наибольшее количество генистеина в соцветиях отмечалось в фазе полного цветения.
