Введение к работе
Актуальность проблемы. Вирус клещевого энцефалита (TBEV), представитель семейства Plaviviridae, переносимый клещами рода Ixodes, является возбудителем опасного заболевания центральной нервной системы человека. Актуальность исследований флавивирусов обусловлена их постоянной циркуляцией б природных очагах и периодическими вспышками заболеваний, что вызывает необходимость совершенствования средств вакцинопрофилактики и иммунодиагностики. Поверхностный гликопротеин (белок Е) вириона играет важнуп роль в биологии флавивирусов. Белок Е индуцирует защитный иммунный ответ и удаление вируса из организма. Установление антигенной структуры белка Е ТВЕУ представляет научный и практический интерес в плане исследования молекулярных основ противовирусного иммунного ответа и создания вакцин и диагностикумов на основе пептидов.
Цель настоящей работа состояла в исследовании антигенной структуры белка оболочки вируса клещевого энцефалита при помощи моноклоналышх антител и локализации антигенных сайтов вирусной нейтрализации. В работе решались следунцие конкретные задачи: I) установлений топографии антигенных детерминант; 2) изучение влияния различных денатурирующих агентов на антигенные свойства белка Е; 3) локализация некоторых антигенных детерминант'; 4) сравнение иммунологических свойств нативяого и денатурированного белка Е, а также его фрагментов.
Научная новизна и практическая ценность работы. На первом этапе работы было показано, что очищенный белок Е вируса клещевого энцефалита обладает всеми иммунологическими характеристиками ТВЕ7. Впервые было продемонстрировало, что белок Е в очищенном виде как антиген не идентичен белку Е в составе вириона.
Методом конкурентного анализа с использованием широкого набора монэклональных антител выявлено три антигенных домена белка Е ТВЕУ штамма Софьин и два домена бежа Е TBEV штамма Минск-256, гетерогенных по функциональной активности и конформационной устойчивости. Эпитопы, участвующие в вирусной нейтрализации, образуют один основной антигенный сайт, частично расположенный в районе 375-471 АО белка Е.
Впервые было показано, что самый крупный cWBr-фрагмент белка Е с молекулярной массой (Мр) 14,5 кДа гликозилирован и расположен
в районе 78-176 аминокислотных остатков (АО). Гликопептид 7S-I76 АО взаимодействует с рядом моноклоналышх антител, четыре эпитопа локализованы вблизи 89 и (или) 116 АО белка Е.
Установлено, что ангисыворотки к денатурированному белку Е и его сывг-фрагментам не обладают вируснейтрализующей активностью, что связано с индукцией антител эпитопами, не совпадающими с нативными.
Публикации и апробации. По материалам диссертации
опубликовано 5 статей. Кроме того, материалы работы докладывались на международном симпозиуме "2nd Symp. on Arboviruses in the Mediterranean Countries (Dutrovnic, 1989) и на Всесоюзном симпозиуме "Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и вакцинопрофилактики клещевого энцефалита" (Иркутск, 1990 г.).
Структура работы. Работа состоит из настоящего Введения, Обзора литературы по структурно-функциональным исследованиям вирионных антигенов флавивирусов, Экспериментальной части, Результатов и их обсуждения. Работа изложена на 129 страницах, включая 109 страниц текста, 17 рисунков, 7 таблиц и списка лк.ературы (150 ссылок). "