Введение к работе
-3-
Актуальность работы. Одной из актуальных задач современной биотехнологии является создание новых лекарственных препаратов на базе пептидных соединений, которые выгодно отличаются высокой биологической активностью и отсутствием побочных эффектов (Овчинников HI А. ,1987).
В Российской Военно-медицинской академии успешно развивается направление, связанное с разработкой и внедрением в медицинскую практику пептидных биорегуляторов (цитомеди-нов), полученных экстракцией из тканей и органов животных по методу В. Г. Морозова, В. X Хавинсона (1981 г.). Согласно выдвинутой гипотезе, цитомедшш являются биологическими регуляторами, осуществляющими перенос необходимой для нормального функционирования, развития и взаимодействия клеток специфической информации (Морозов В. Г. , Хавинсон В. X. ,1983; Яковлев Г. М., Морозов В. Г. , Хавинсон В. X. , 1986). К настоящему времени создан новый класс лекарственных средств, которые находятся на различных стадиях экспериментального и клинического изучения. Одним из перспективных направлений является создание и внедрение в производство биорегулирую-щего органопрепарата, выделенного из тканей сердца крупного рогатого скота-кардиалина, что предполагает решение ряда ряда прикладных задач, связанных с разработкой методов контроля качества его производственных серий по составу и био-огической активности.
Цель работы заключалась в изучении состава, биологической активности, разработке физико-химических и биологических методов стандартизации и технологического контроля комплексного пептидного биорегулирущего препарата из сердца - кардиалина, для чего были поставлены следующие задачи:
исследовать состав кардиалина;
осуществить сравнительный физико-химический анализ кардиалина и других пептидных препаратов (цитомеди-нов), полученных по сходной технологии;
обосновать и отработать физико-химический метод контроля состава кардиалина в условиях производства;
разработать модель для изучения биологической активности кардиалина in vitro;
изучить биологическую активность кардиалина in vitn
обосновать и разработать метод биотестирования, пр: годный для использования в условиях производства
Научная новизна работы. Впервые с использованием ряд современных физико-химических методов (гель-электрофорез изозлектрофокусирование, высокоэффективная жидкостная хро матография, ионообменная тонкослойная хроматография, амино кислотный анализ) проведено детальное изучение состава кар диалина и других пептидных препаратов (цитомединов).полу ченных из различных органов и тканей животных по сходно технологии. Выполнен сравнительный анализ состава препара тов, выявлены характерные особенности компонентного состав кардиалина.
Проведен сравнительный анализ эффективности различны физико-химических методов фракционирования многокомпонент ных пептидных препаратов и обоснована целесообразность ис пользования метода ионообменной тонкослойной хроматографк для количественной оценки фракционного состава кардиалина учетом особенностей состава препарата для контроля технолс гического процесса производства кардиалина.
Изучены антиоксидантные свойства кардиалина. Проде монстрировано тканеспецифичное подавление кардиалином пере кисного окисления липидов мембран гомогената ткани сердеї ной мышцы.
Продемонстрирован биологический эффект кардиалина } клеточном уровне,который проявляется в прямом В03ДЄЙСТВІ на метаболизм кардиомиоцитов, приводящем к увеличению р* зистенгности клеток к дефициту кислорода.
Установлено, что для стандартизации и технологически контроля биологической активности производственных сері кардиалина целесообразно использование теста на подавлені сукцинатдегидрогеназной активности гомогената ткани серде1 ной мышцы крысы.
Практическая значимость работы. Впервые проведен сравнительный физико-химический анализ кардиалина и ряда пептидных биорегулируювдх препаратов. Обоснована целесообразность технологического контроля фракционного состава карди-алина методом тонкослойной ионообменной хроматографии и разработан метод контроля биологической активности кардиалина по его влиянию на сукцинатдегидрогеназную активность гомогенага ткани сердечной мышцы крысы. Выявлены интегральные показатели жизнеспособности изолированных кардиомиоци-тов крысы, которые могут служить критерием биологической активности кардиалина.
Апробация работы. Результаты работы доложены на конференциях: "Роль пептидных биорегуляторов (цитомединов) в регуляции гомеостаза" (Ленинград, 1987),"Биохимия - медицине. Молекулярные механизмы формирования патологических состояний" (Ленинград, 1988), XI конференции "Изобретательство и рационализация в медицине и медицинской промышленности" (Ленинград, 1988), "Вопросы медицинской экологии и проблемы улучшения здоровья населения Забайкалья и КНДР" (Чита,1989), "Применение современных лекарственных препаратов и медицинской техники на крупных промышленных предприятиях" (Тольятти, 1991); на LX сессии общего собрания АМН СССР (Ленинград, 1990); на Первом российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1992), на симпозиуме "Пептидные биорегуляторы - цитомедины" (Санкт-Петербург, 1992).
Материалы диссертационной работы включены в научно-техническую документацию, представленную в Фармакологический комитет для получения разрешения на клинические испытания простатилена, кортексина, ретилина (Протокол N 16 от 18.10. 90 г. заседания Фармакологического комитета МЗ СССР о разрешении клинических испытаний кортексина; Протокол N 3 от 14.02. 90 г. заседания Фармакологического комитета МЗ СССР о разрешении клинических испытаний простатилена; Протокол N 1 заседания Фармакологического комитета МЗ СССР отЮ. 01.90 г. о разрешении клинических испытаний ретилина), а также в на-
- 6 -учно-техническую документацию, представляемую в Российский фармакологический комитет для получения разрешения на клинические испытания кардиалина.
По результатам работы оформлено 20 рационализаторских предложений и изобретение "Способ оценки биологической активности пептидного препарата из сердца (кардиалина)" (решение о выдаче авторского свидетельства по заявке N 4881468 /14/109270 от 31.05.91), которые внедрены в практику работы ШЛ биорегуляторов Российской Военно-медицинской академии и завода медицинских препаратов ПО "Ленмясокомбинат им. С. М. Кирова".
По теме диссертации опубликовано 17 научных работ.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 215 страницах машинописного текста, включая 23 таблицы и 53 рисунка ; состоит из введения, обзора литературы, двух глав собственных исследований, заключения, выводов и приложения. Список литературы включает 283 источника (75 отечественных и 208 зарубежных).