Разработка питательных сред для культур клеток млекопитающих на основе ферментативного гидролизата казеина Коренева, Анна Ивановна

Введение к работе

Актуальность работы. Метод клеточных культур находит широкое ркменэнпе во многих областях биологии, медицины, и ветер.шарии. . естущие масштабы производства диагностических, и лечебно-профидак-ичесюк препаратов требуют совершенствования технологии г/льтпризвания клеток и, в пєрвуп очередь, создания более простых, и деше-jx питательных сред. Перспективным направлением ь данной области вляется разработка питательных сред для культур клеток млекопитаю- ₍ т с использованием белковых гидролизатов взамен дорогій и дефи-

иных компонентов. сред, в первую очередь аминокислот. Проблему жрацения количества сыворотки крови в питательных средах также эжно решать за счет использования белковых гидролизатов.

Разработанным до сих пор отечественным гидролизным средам для теток млекопитающих присущи некоторые недостатки: использование їфицитиого исходного белкового сырья (мясо, кровь, дрожжи), агрес-ганых гидролизующнх агентов; сложность процессов получения высоко-пачечных гидролизатов (ионообменная очистка либо необходимость >едварительнсй подготовки субстрата) , невозможйость снижения¹ кон->нтрации сыворотки крови; нестабильность роста клеток.

Таким образом, разработка недефицитных, недорогих, высокс-прй-ктивных питательных сред для культур клеток млекопитающих на со->ве гидролиэатов белков с заменой большей части гмлнокислот и сиротки крови, является актуальной и отвечает потребностям дадьпей-то развития клеточной биотехнологии.

Цель н задачи исследований. Целью исследований является разра--тка отвечающих указанным требованиям питательных спад дли культур етск млекопитающих на основе ферментативных гидролиэпгон казеина, лученных под действием ферментных препаратов от «ствениого про-

.-4-

изводства..

" Достижение поставленной цели осуществлялось решением следующи 'основных задачі

і) отработка режимов гидролиза казеина с использованием оте чественных ферментных протеолитических препаратов для получени гидролиэатов о вескими ростовыми свойствами;

' 2) o6oci|oi)."j-jie способа очистки ферментативных, гидролиэатов ка зеипа от токсичных для клеток млекопитающих примесей;

, З) разработка питательной' среды для культур клеток млекопитаю щих ' с ферментативным гидролизатом казеина в качестве источник большинства аминокислот;

4) получение малосывороточных питательных сред для культивиро
вания клеток млекопитающих на основе ферментативного гидролиэат
казеина. '

Научная новизна результатов. Предложены новые питательные ере ды для куль тур 'клеток млекопитающих с использованием в качестве ис точника питательных и ростовых факторов ферментативного гидролиэат казеина. Отработаны режимы гидролиза казеина отечественными' фер менгными препаратами протосубтилином и панкреатином таким образом чтобы гидролиэаты ^; обладали высокими ростовыми свойствами в отноше ніш клеток млекопитающих. Обоснован способ очистки гидролиэата о цитдтоксических примесей при помощи активного угля. Показана воз можность полноценной замены ферментативным гидролизатом казеин большей части высокоочгаденкых индивидуальных аминокислот и сьшорот ки крови крупного рогатого скота е стандартных средах для культу клеток млекопитающих.

Практическое значение работы. Работа явилась научной основе для разработки технологии производства питательных сред для культи вирования клеток млекепктаюад»:. По результатам работы разработана

.передана заказчикам следующая ксрийт.:?кс -ч-гнэтес:"/; д. к.';,:ект ==:::=:

1. лабораторный регламент на приготовление питателіноі: средь' для культур клеток ВК-РЛ и ЛЭЧ с использованием $ерие-!т=т;;ві;ого гндролизата казеина как источнике болыт.ткства аминокислот;

2. лабсрзторный регламент культивирования клеток ЕНК-21 т. v.a-лосывороточной питательной среде с 1-2 1 сыворотки крови крупного рогатого скстз' на сечове оі«чєотйі?нних ингредиенте.^;

3. опытно-промышленный регламент получения малосывороточной питательной среды, используемой при производстве противоящурнои вакцины.

Результаты работы использованы при культивировании клеток ВНК-21 для получения противоящурнои вакцины на Покровском заводе биопрепаратов (Владимирская обл.) и лимфоидкых клеток - продуцентов вируса СПИД в НПО "Вектор" (Новосибирская обл.).

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались нз II Всесоюзном совещании "Культивирование клеток животных и человека" (Пущино, 1985 г.), на Всесоюзной конференции "Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии" (Махачкала, 1990 г.)', а также на восьми научно-технических конференциях НИИВХМП и пауч-но-техническом совещании в НПО "Вектор".

Публикация результатов. Основные результаты диссертационнра работы опубликованы в 9 научных работах в период о J.983 по 1991 г"., получено положительное решение по заявке на изобретение.

'Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, главы "Материалы и методы исследований", трех глзв собственных исследований, заключения, выводов, списка использованных источников.

Работа изложена на 150 стр. машинописного текста и содержи"¹ 24 'таблицы и 12 рисунков. Список источников вклгча?" 251 наименование

Vі;.том'числе 148; на піпсгрзшшх языка;, .

. _:.. Личный, склад а'вгзза. Вое основные работы. были: выполнены¹' ;ліwho дазторру под руководством'доктора технических-наук С. ^;jБ.'Строкова,й кандидата медицинских наук А. С. ПригодЫ.

содержании РАБОТЫ ', .

_ti> ., Во введении к диссертационной работе.обоснована актуальность '.-.Выбранной темы и. определены общие задачи и цели исследования Г '