Содержание к диссертации
Введение
2 Обзор литературы 10
2.1 Физико-химические и молекулярно-клеточные предпосылки использования ионизирующих излучений в радиационной биотехнологии 10
2.1.1 Радиочувствительность клеток растительного, микробного и животного происхождения к ионизирующим излучениям 13
2.1.2 Использование альтернативных стимуляторов роста клеток в культуральных средах для репродукции вирусов 19
2.2 Использование ионизирующих излучений в радиационной биотехнологии 29
3. Собственные исследования 36
Материалы и методы исследований 36
3.1.1 Материалы 36
3.2.1 Методы исследований 37
4 Результаты собственных исследований 40
4.1 Определение оптимальных стерилизующих доз - лучей для деконтаминации питательных сред 40
4.2 Изучение стабильности физико-химического и биохимических свойств облученных - лучами питательных сред 44
4.3 Изучение влияния малых доз -лучей на пролиферативную активность клеток культуры MDBK 51
4.3.1 Выживаемость облученных различными дозами -лучей клеток культуры MDBK 52
4.4 Изучение влияния малых доз -лучей на ростовые свойства клеток MDBK 55
4.4.1 Влияние фракционированного облучения на динамику роста клеток 57
4.5 Изучение механизма формирования отдаленных эффектов радиогенного воздействия на культуру клеток MDBK 59
4.5.1 Оценка изменчивости клеток под воздействием -лучей 59
4.5.2 Цитогенетическая характеристика однократно и двукратно облученных клеток MDBK 61
4.5.2.1 Изучение стабильности радиоиндуцированных хромосомных нарушений у облученных клеток 66
4.6 Репродуктивная активность вирусов, выращенных на деконтаминированных - лучами питательных средах и стимулированных путем двукратного облучения клеток MDBK 69
5 Заключение 72
6 Практические предложения 94
7 Список сокращений 95
8 Список использованной литературы 97
9 Приложения 131
- Радиочувствительность клеток растительного, микробного и животного происхождения к ионизирующим излучениям
- Изучение стабильности физико-химического и биохимических свойств облученных - лучами питательных сред
- Цитогенетическая характеристика однократно и двукратно облученных клеток MDBK
- Репродуктивная активность вирусов, выращенных на деконтаминированных - лучами питательных средах и стимулированных путем двукратного облучения клеток MDBK
Радиочувствительность клеток растительного, микробного и животного происхождения к ионизирующим излучениям
Поскольку в биотехнологическом процессе при производстве биопрепаратов используются клетки органов и тканей животного, растительного и микробного происхождения, в технологическом процессе приходится учитывать чувствительность и устойчивость этих биологических объектов к различным факторам внешней среды: физическим (температура, давление, ионизирующая и неионизирующая радиация), химическим (различные концентрации солей, рН, токсиканты) и биологическим (антибиотики, фитонциды, эндо - и экзотоксины), поэтому, считаем необходимым вкратце изложить основные моменты по радиочувствительности клеток зоогенного, фитогенного и микробного происхождения. К числу наиболее радиочувствительных относятся клетки костного мозга, крипты кишечника, эпидермальные клетки, низкодифференцированные клетки слизистой желудка, роговой зоны хрусталика глаза и головного мозга, нейробласты спинного мозга, эмбриональные клетки, сперматогонии и ооциты. Группу наиболее устойчивых к действию излучения клеток организма животных составляют непролиферирующие зрелые клетки печени и мышц, нейроны головного и спинного мозга, эритроциты. Гибель радиочувстивительных клеток, наблюдается после облучения животных в дозах 0,1-4,0 Гр, а 3 радиорезистентных – при 10-100 Гр [123]. Исключение из вышеупомянутых правил представляют лимфоциты тимуса и периферической крови, гибель которых отмечается при дозах облучения 0,25 Гр. При этом различают 3 формы радиационной гибели клеток: репродуктивную, интерфазную гибель высокорадиочувствительных клеток (например лимфоидных) и интерфазную гибель радиочувствительных клеток [59, 204, 293, 297].
В системе кроветворения лимфоидная ткань более радиопоражаема. После высоких доз лимфатические узлы опустошаются вследствие гибели лимфоцитов, фолликулы селезенки разрушаются, их клетки погибают, лимфоидные органы стенки пищеварительного тракта (небные, глоточные миндалины, пейеровы бляшки, солитарные фолликулы) некротезируются [171].
При действии радиации на половые железы больше страдает генеративная функция (гаметогенез) [66]. Весьма радиопоражаемым является зародышевый эпителий семенных канальцев, зрелые сперматозоиды более устойчивы, а клетки Сертоли и интерстициальные клетки являются радиорезистентными. Общее облучение большой дозой временно или навсегда прекращает овуляцию (зрелые яйцеклетки не оплодотворяются и не превращаются в зиготы). Зигота и зародыши до имплантации очень радиопоражаемы, причем наиболее чувствительным являются период органогенеза, т.е. 2-я половина зародышевого периода развития [20,66].
Среди органов пищеварения наиболее радиопоражаемым является кишечник, и особенно его тонкий отдел [20,36,31].
Железы внутренней секреции наиболее быстро отражают изменения, возникшие в других системах организма в результате радиационного воздействия. Из органов внутренней секреции наиболее радиочувствительными являются гипофиз и кора надпочечников, а щитовидная и паращитовидная железы довольно резистентны [66]. Радиочувствительность и иммунокомпетентных клеток системы мононуклеарных фагоцитов разных органов и тканей может различаться: у макрофагов селезенки Х-мин составляет (129-735)10-4 Кл/кг, макрофагов печени – 83610-4 Кл/кг, легких -1100 .10-4 Кл/кг; а Х-макс - (2322-16099)-10-4 Кл/кг [112].
Как было сказано выше, лучевую патологию рассматривают как вторичный иммунный дефицит [53,54], вызванный гетерогенной радиочувствительностью иммунокомпетентных клеток, участвующих в иммунном реагировании организма на стрессовые факторы с участием всех субпопуляций лимфоцитов. В этой связи изучение чувствительности Т- и В-систем и их лимфоцитов субпопуляций к действию радиации может оказаться необходимым при коррекциях приобретенных дефектов иммунной системы у сельскохозяйственных животных [193].
Что касается радиочувствительности клеток растительного происхождения, то эти сведения более подробно будут представлены в разделе «Стимулирующее действие ионизирующей радиации на клетки животного, растительного и микробного происхождения».
Учитывая, что радиорезистентность микроорганизмов имеет прямое отношение к рассматриваемому вопросу, считаем необходимым более детально остановиться на данной проблеме.
По вопросам влияния ионизирующих излучений на бактериальную клетку имеется обширная литература, которая суммирована в трудах [4, 89, 278, 313, 136, 317, 242, 312]. Поэтому считаем целесообразным остановиться только на ключевых моментах, которые сделаны в виде выжимки (дайджест) этих работ.
В 1896 г., спустя год после открытия, сделанного Рентгеном, в печати появилось первое сообщение о действии нового вида излучения на микроорганизмы. Это была работа, проведенная им на бактериях -возбудителе брюшного тифа [284]. В настоящее время изучение радиочувствительности бактерий непосредственно связано с использованием ионизирующих излучений для лучевой стерилизации медицинских изделий и препаратов, для обработки пищевых продуктов и др. [57].
Под радиочувствительностью следует понимать способность вещества, клетки или какой-либо клеточной структуры взаимодействовать с ионизирующим излучением, результатом чего будут физико-химические изменения вещества и биологические эффекты [65]. Биологические эффекты проявляются в задержке процесса деления клетки и снижении способности размножаться, в нарушениях клеточного метаболизма, повреждениях регуляторных механизмов клетки, видимых морфологических изменениях, гибели клетки. Клетка не однородна в своей радиочувствительности. Например, ядро клетки более чувствительно к ионизирующим излучениям, чем цитоплазма или клеточная оболочка, процессы фосфорилирования более чувствительны, чем весь процесс дыхания клетки и т. д. [22]. Если бы репарационные процессы не компенсировали большинства повреждений клетки, вызываемых ионизирующими излучениями, то любое лучевое воздействие приводило бы к гибели клетки. На самом деле этого не происходит благодаря способности клеток восстанавливать радиационные повреждения. Впервые способность клеток восстанавливать повреждения, вызванные действием ионизирующих излучений, была обнаружена [125] при облучении дрожжей. В последующие годы процессы восстановления клеток после облучения тщательно изучались и сущность этого интересного процесса была детально описана советскими радиобиологами [77] и [47].
При облучении популяции микроорганизмов наиболее чувствительна к действию излучения их способность к бесконечному делению, о чем обычно судят, высевая облученный материал на агаровую питательную среду и наблюдая образование (через 24ч) видимых на глаз макроколоний [47]. При этом облученные микроорганизмы не обязательно гибнут. Многие жизненные функции у них остаются: они дышат, осуществляют ряд метаболических функций, растут, часто образуя гигантские клетки (филаменты), но способность к синтезу ДНК, редупликации генома, делению и образованию полноценных дочерних клеток необратимо утрачена, что и проявляется в их неспособности образовывать видимые колонии, т. е. размножаться в питательной среде [165, 37, 237, 238, 249]. Это состояние бактерий обычно называют репродуктивной гибелью [146]. При использовании ионизирующего излучения для стерилизации и обеззараживания не ставится задача полностью убить существующие в облученном материале микроорганизмы (для чего потребовались бы гораздо большие дозы облучения), а только подавить их способность к бесконечному размножению, что является причиной инфекционности зараженного микрофлорой материала [165].
Прекращение деления клетки (репродуктивная гибель), согласно структурно-метаболической теории, является результатом вероятностного взаимодействия двух противоположно направленных групп процессов гибели и репарации клетки повреждений [87,12, 238, 307, 289].
Изучение стабильности физико-химического и биохимических свойств облученных - лучами питательных сред
Учитывая разноречивость литературных данных о том, что облучение пищевых продуктов и питательных сред в больших дозах вызывает изменение биологических свойств их, с одной стороны, и полное отсутствие изменений в указанных объектах после облучения, с другой [202], нами была проведена следующая серия опытов с целью изучения изменения биологических свойств облученных питательных сред. При этом учитывали также, что стерилизирующие дозы - лучей (0,1-6,0)х.104 Гр не приводят к изменению биологических свойств вакцин, сывороток и различных питательных сред, а по мере увеличения дозы облучения от 10 до 50х104 Гр происходит значительное разрушение первичной и вторичной структур белка, радиолиз аминокислот, полисахаридов, мукополисахаридов, липидов с появлением токсических (окисленных) радикалов ацетальдегида, изомасляной, масляной кислот, оксихинонов, формальальдегида, малонового диальдегида, меркаптана, карбонильных соединений, свободных жирных кислот [89].
Для выяснения этого вопроса, нами проведены опыты на облученных питательных средах, в широком диапазоне доз - лучей: (0,1; 0,3; 1,0; 3,0; 6,0; 10,0; 20,0; 30,0; 50,0) х104 Гр. При этом в качестве питательной среды использовали сыворотку крови крупного рогатого скота, которая является полноценной по питательным качествам, в которой содержатся все компоненты (белки, аминокислоты, полисахариды, липополисахариды, липиды), обеспечивающие, с одной стороны, полноценный рост микроорганизмов, культур клеток животного происхождения, и во - вторых, именно перечисленные компоненты сыворотки, подвергаясь радиолизу, вносят значительный вклад в образование радиоиндуцированных токсических продуктов, оказывающих отрицательное влияние на культивируемые на них микроорганизмы и клетки животного происхождения.
Поэтому на первом этапе опытов изучали токсичность облученной в различных дозах -лучей сыворотки крови КРС с использованием биохимической (МДА) и иммунохимической (РНГА) тест- систем. В качестве критерия оценки радиотоксичности использовали титры хиноидного радиотоксина в РНГА с использованием антительного варианта эритроцитарного диагностикума (АТЭД) и концентрацию малонового диальдегида (МДА) с использованием тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Результаты индикации токсических продуктов радиолиза в облученной -лучами питательной среде (сыворотки крови КРС), в зависимости от использованных доз ионизирующих излучений в МДА - и РНГА тест-системах, представлены в таблице 3.
Из данных таблицы видны, что с увеличением дозы облучения питательной среды происходит более интенсивное образование токсических продуктов радиолиза: ТБК - активных соединений (МДА) и гемагглютинирующих хиноидных радиотоксинов (РНГА).
Хотя содержание ТБК - активных продуктов и хиноидного радиотоксина при дозах облучения (0,1 - 3,0)х104 Гр было в 2,5-3,0 раза выше, чем таковое у необлученных сред, однако указанные дозы токсических продуктов радиолиза для клеток животного происхождения являются малотоксичными и не вызывают апоптотической гибели клеток.
Наиболее опасные концентрации токсических продуктов радиолиза в облученной сыворотке начинают накапливаться при дозах облучения (6-10)х104 Гр, составляя 5,1±0,31 log2 – для хиноидного радиотоксина. Дальнейшее увеличение дозы облучения (20-30)х104 Гр питательной среды индуцирует существенное увеличение синтеза липидного (МДА) и хиноидных (ХРГ) радиотоксинов, содержание которых составило 6,6-6,7 мкмоль/г (малондиальдегид) и 6,1-7,3 log2 (хиноидный радиотоксин). Максимальное накопление токсических продуктов радиолиза белков, липидов и липополисахаридов, содержащихся в сыворотке крови, наблюдается при облучении ее в дозе 50х104 Гр, когда содержание ТБК-активных продуктов (МДА) составляло 9,5±0,81 мкмоль/мл (Р 0,001), а гемаглютинирующего антигена-хиноидного радиотоксина - (ХРТ) -9,9±0,43 log2 (P 0,001).
Следовательно, облучение сыворотки крови КРС в дозах 0,1 -3,0х104 Гр не приводит к существенному увеличению содержания токсических продуктов радиолиза белков, углеводов и липидов питательной среды, что, по нашему мнению, не должно отражаться на ее биологических свойствах. Облучение сыворотки крови -лучами в дозах (6,0 -10,0)х104 Гр вызывало значительное усиление образования радиоиндуцированных токсических продуктов радиолиза, которые, оказывали отрицательное влияние на жизнедеятельность клеток микробного и животного происхождения.
Повышение содержания радиоиндуцированных токсических продуктов радиолиза в облученных питательных средах могло оказать отрицательное влияние на физико-химические, биохимические и ростовые свойства сывороток, отражаясь как на выживаемости культивируемых на них клеток млекопитающих, так и на их пролиферативной активности. Однако, прежде чем изучать возможную ростингибирующую активность облученных питательных сред, необходимо было изучить влияние облучения на вышеперечисленные параметры качества сыворотки крови КРС.
В качестве оцениваемых параметров при этом использовали прозрачность, рН, содержание белка, липидов, альбуминов и глобулинов в подвергнутых – облучению сыворотках крови КРС.
Результаты проведенных биохимических исследований представлены в таблице 4.
Из представленных в таблице данных видно, что облучение сыворотки крови в пределах от 0,1 до 3,0х104 Гр не приводило к существенным изменениям основных параметров: по прозрачности, рН, содержанию общего белка, общих липидов, фракционного состава белков (глобулинов, альбуминов) облученные и необлученные сыворотки имели почти идентичные значения.
Увеличение дозы облучения до 6,0х104 Гр приводило к значительным изменениям изучаемых показателей. Эти изменения характеризовались появлением опалесценции, увеличением оптической плотности в 1,55 раза (Р 0,05), закисанием среды (уменьшение рН в 1,30 раза, Р 0,05), уменьшением содержания общего белка в 1,1 раза (Р 0,05) глобулинов – в 1,07 (Р 0,05), уменьшением содержания общего белка в 1,1 раза, альбуминов - в 1,19 (Р 0,05), доза, липидов - в 1,16 раза (Р 0,05).
Полученные в предыдущих исследованиях данные по оценке физико-химических, биохимических и токсических свойств облученных –лучами сывороток послужили основанием для проведения дальнейших исследований по изучению влияния облучения на пролиферативную активность культур клеток при выращивании их на облученных питательных средах.
В данной серии экспериментов использовали среду, состоящую из 0,5% гидролизата лактальбумина на растворе Хэнкса - 90% и 10% сыворотки крови КРС с добавлением соответствующих антибиотиков. При этом были использованы образцы ГЛА и сывороток, облученных в дозах от (0,1 до 6,0)х104 Гр, соответственно.
В качестве тест - культуры в опытах использовали клетки почки эмбриона крупного рогатого скота - МDBK, которые выращивали на подвергнутых – облучению в вышеуказанных дозах ГЛА с содержанием 10% сыворотки крови КРС. С каждой комбинацией облученных компонентов проведено по 9-12 опытов, при этом контролем служила среда, состоящая из необлученных ГЛА и сыворотки КРС. Результаты изучения пролиферативной активности культуры MDBK, выращенной на облученных различными дозами – лучей, представлены в таблице 5.
Цитогенетическая характеристика однократно и двукратно облученных клеток MDBK
Результаты цитогенетического анализа клеток исходной культуры показало, что модальное число хромосом составляло 40-44, а предел изменчивости -38-77.
С помощью ПЦР - амплификации с произвольным праймером №29 были получены ДНК- профили контрольных образцов культуры MDBK.
Результаты электрофореза продуктов ПЦР - амплификации ДНК, показали, что линии MDBK образуются 11 паттернов молекулярной массой 255, 278, 384, 404, 521, 569, 633, 707,1085, 1175 и 1508 пар нуклеотидов.
Результаты цитогенетических исследований облученные в малых (0,05-4,95 Гр) и больших дозах (5,0-10,0 Гр) дозах культивируемых клеток MDBK показали, что радиобиологический эффект зависел от дозы и кратности их облучения. Результаты изучения влияния однократного облучения клеток MDBK на цитогенетические показатели представлены в таблице 8.
Из представленных в таблице материалов видно, что однократное облучение клеток MDBK, начиная с дозы 3,0 Гр и выше, приводит к статистически значимому повышению количества хромосомных аберраций в виде мостов, фрагментов и клеток с двойными мини хромосомами (ДМХ). При этом в необлученной (контрольной) культуре клеток уровень хромосомных поломок находился в диапазоне 1,03-3,1 % на отношению к общему количеству исследованных анафаз.
Важно, это повышение количества хромосомных аберраций в малых дозах облучения (0,05-1,0 Гр) происходило, главным образом, за счет мостов (1,13%) и двойных минихромосом (1,07%) и меньше - за счет фрагментов, что свидетельствует о повышенной способности хромосом к репарации нанесенных повреждений. С повышением дозы облучения происходило изменение характера и соотношения вариантов хромосомных нарушений. Так, при облучении культуры в дозах, выше 6,0 Гр, а именно, начиная с дозы 7,0 Гр, наблюдалось повышение хромосомных аберраций в виде разрывов -(фрагментаций) хромосом, которые выражались в увеличении количества фрагментов до 9,39% (Р 0,001) по сравнению с контрольным уровнем, в то время как хромосомных нарушений с образованием мостов и двойных минихромосом было в 1,3 2 и 1,02 раза меньше, чем фрагментаций (разрывов) хромосом. Такая тенденция нарушения хромосом клеток MDBK под воздействием - лучей наблюдалась и при повышении доз облучения до 8,0; 9,0 и 10,0 Гр.
Значительное превышение содержания аберрантных клеток с фрагментами (разрывами) по сравнению с мостами указывает на сниженную способность хромосом к ассоциации (репарации повреждений) с образовавшимися фрагментами или друг с другом (Баранцева М.Ю. и др., 2009).
Учитывая литературные данные о том, что предварительное облучение клеток растительного, животного и микробного происхождения повышает резистентность к последующему облучению летальными дозами, проводили вторую серию опытов по изучению влияния двукратного облучения клеток малыми и более высокими дозами -лучей.
Результаты цитогенетических исследований облученных в малой (0,05% Гр) и больших (3,0-10,0Гр) дозах – лучей клеток MDBK представлены в таблице 9.
Из представленных в таблице материалов видно, что двукратное (0,05 Гр, интервал 3 мин, 3,0; 5,95; 7,0 и 10,0 Гр) оказывало значительно меньшее нарушение хромосом клеток изучаемой тест - культуры. Характерным для такого варианта радиационного воздействия на клетки является то, что как при малых (3,0; 5,0 Гр), так и больших (7,0; 10,0 Гр) дозах - лучей наблюдалась тенденция снижения хромосомных аберраций в виде мостов, фрагментов и двойных минихромосом и, самые важное – снижение количества фрагментов, обусловленных разрывом хромосом, ведущих к апоптозной гибели клеток.
Так, если при однократном облучении клеток в дозе 3,0 Гр количество фрагментов составлено 2,99% (3-кратное превышение контрольного уровня), то при 2-кратном облучении количество их снизилось в 1,67 раза (Р 0,05) по сравнению с однократным радиационным воздействием - лучей на культуру клеток. Количество нарушений хромосом в виде мостов и двойных минихромосом при таком варианте облучения незначительно отличалось от контроля.
При увеличении повторной дозы облучения до 5,0 Гр, хотя и приводило к 2 – кратному увеличению количества фрагментов хромосом в популяции облученных клеток, однако оно было в 2,91 раза (Р 0,01) меньше, чем при однократном воздействии указанной дозы –лучей. Такая существенная тенденция снижения количества хромосомных аберраций клеток наблюдалась и при дальнейшем повышение дозы радиационного воздействия (7,0;10,0 Гр), однако оно было значительно ниже, чем при однократном облучении летальными дозами – лучей. Возможно, повышение радиорезистентности клеток изучаемой культуры при повторном облучении происходит в результате включения радиационных процессов при достижении определенного уровня повреждений клеток (Кудряшов Ю.Б., 1987).
Таким образом, доза облучения клеток MDBK 0,05 Гр является адаптирующей, которая после повторного облучения в сравнительно больших дозах (3,0-5,0 Гр) с интервалом 3 мин между радиогенными воздействиями приводит к статистически достоверному (в 2,91 раза, Р 0,01) снижению выхода хромосомных аберраций (мостов, фрагментов и двойных минихромосом), индуцированных тестирующим облучением.
В связи с тем, что результаты предыдущих исследований по изучению выживаемости и индекса пролиферации облученных культур клеток показали, что по этим показателям наиболее оптимальными дозами облучения их являются в пределах от 0,05 до 5,0 Гр, и отсутствие достоверных различий в индукции хромосомных аберраций в клетках, в качестве тестируемой дозы облучения нами выбраны 0,05 и 5,0 Гр, которые при двукратном облучении оказались менее индуцибельными как по выходу хромосомных аберраций, так и по стимуляции уровня культивируемых клеток.
Репродуктивная активность вирусов, выращенных на деконтаминированных - лучами питательных средах и стимулированных путем двукратного облучения клеток MDBK
Поскольку при конструировании питательной среды в наших экспериментах были использованы как большие (стерилизующие),60 Со, так малые (стимулирующие) дозы – лучей, 137Сs, представлял интерес вопрос – какова вирус-репродуцирующая способность перевиваемой линии клеток MDBK-02 (дважды облученные - радиацией клетки почек плодов коровы).
Учитывая, что основная роль в развитии респираторных заболеваний КРС принадлежит вирусам ИРТ, нами проведена оценка вирусрепродуцирующей активности полученной линии клеток MDBK- 02, выращенной в монослое по отношению к данному вирусу (Рис 2).
Результаты исследований представлены в таблице 11.
Из представленных в таблице материалов видно, что максимальное накопление вируса ИРТ в контроле происходит в течение 48 ч после заражения и достигает 6,1±0,11 lg ТЦД 50/см3 при множественном заражении в пределах 3-0,05 lg TЦД50/кл. Использование питательной среды, облученной –лучами в стерилизующей дозе (1х104 Гр) для выращивания необлученных клеток вызывало увеличение титра вируса в 1,10 раза (Р 0,05) по сравнению с контролем, что на 9,8% больше, чем в контроле.
При репродукции вируса на культуре облученных клеток MDBK-0,2, культивируемых на необлученной питательной среде происходило увеличение концентрации вируса в 1,13 раза (Р 0,05) по сравнению с таковой у контрольной (необлученной ) культурой клеток MDBK.
Максимальное накопление вируса наблюдалось при использовании облученной культуры клеток, выращенной на деконтаминированный – лучами питательной среде, которое происходило в течение 48 ч и достигало 7,1±0,09 lg TЦД 50/см3, превышая контрольные значения в 1,16 раза (Р 0,05).
Таким образом, в результате проведенных исследований нами получена новая радиостимулированная перевиваемая сублиния клеток почек крупного рогатого скота MDBK-02, выращенная на деконтаминированный – лучами питательной среде. Установлено, что облучение одного из важнейших компонентов питательной среды – сыворотки крови КРС в дозе – лучей 137СS 1х104 Гр обеспечивало ее надежную деконтаминацию от микроорганизмов бактериальной и вирусной природы. Двукратное облучение клеток культуры MDBK в малой (0,05 Гр) и большой (5,95 Гр) дозе с интервалом 3 мин обеспечивало развитие адаптивной реакции клеток к ионизирующим изучениям, обеспечивая повышение выживаемости не только к летальному облучению (развитие радиорезистентности), но и повышая индекс пролиферации и конечную плотность клеток. Предварительное облучение клеток в адаптирующей дозе –лучей предотвращало развитие процессов, связанных с индукцией нестабильности генома, сопровождающейся увеличением хромосомных поломок (мосты, фрагменты, двойные минихромосомы).
Использование сублиния клеток MDBK - 02 при выращивании вирусов обеспечивает повышение их вирусрепродуцирующей активности.