Введение к работе
Актуальность проблемы
Благодаря широкому спектру эффектов, направленных на нормализацию гомеостазе, фитоадаптогены (женьшень, элеутерококк, ро-диола розовая и др.) находят все большее применение как средства профилактики и терапии при многих заболеваниях [Дардымов И.В., 1967; Яременко К.В., 1990; Kim S.H et al., 1993].
Очевидно, что использование растительных адаптогенов в медицине, например в качестве иммуномодуляторов, требует стандартизация, поскольку дозы препарата могут варьировать в зависимости от активности последнего.
Известен ряд методов определения биологической активности фитоадаптогенов In vivo [Брехман И.И., 1957; Гриневич М.А., 1964; Брехман И.И. и др.. 1966; 1968; Добряков Ю.И., 1978]. Однако подобные исследования трудоемки и экономически нецелесообразны из-за необходимости применения животных. Поэтому проблема биологического контроля данных препаратов остается весьма актуальной.
Исходя из неспецифического характера действия фитоадаптогенов, предпринимаются попытки разработать более доступные способы их биологического контроля на моделях In vitro. С этой целью использовали мембраностабилизирующий эффект растительных адаптогенов, проявляющийся в снижении гемолиза эритроцитов в присутствии окисленной олеиновой кислоты (Дардымов И.В., 1976; Крендаль Ф.П. и др., 1988].
Другим объектом для выявления биологической активности фитоадаптогенов явились простейшие эукариоты - дрожжи. Ранее проведенные исследования влияния препаратов женьшеня на ростовые характеристики дрожжей S. cerevislae показали перспективность использования данной модели для биологического контроля растительных адаптогенов ІГаврилов К.И., 1963; Юртаева Н.М. и др., 1988].
Нами было предложено градуировать активность фитоадаптогенов по уровню пролиферации медленно растущих клеток S. cerevislae. Замедление роста возможно, в частности, при замене источника углерода, обеспечивающего наибольшие скорости роста (глюкоза), на менее предпочтительный источник - этанол. Можно было ожидать, что добавление адаптогенов в среду с этанолом приведет к ускорению прироста клеток, и при подтверждении выдвинутого тезиса - рассматривать этот фактор как характеристику биологической активности фитоадаптогенов.
Цель исследования: изучить возможность использования дрожжей S. cerevlslae в качестве тест-объекта для определения биологической активности препаратов женьшеня и родиолы розовой я разработать количественный способ биологического контроля фитоадаптоге-нов.
Задачи исследования:
-
Исследовать динамику роста клеток дрожжей S. cerevlslae в полной и минимальной питательных средах в присутствии биопрепаратов женьшеня.
-
Изучить влияние биопрепаратов женьшеня я родиолы розовой на рост культуры дрожжей S. cerevlslae при сниженной пролифера-тивяой активности последней.
-
Оценить возможность определения содержания суммарной гла-коэндной фракции (СГФ) в биопрепаратах женьшеня я фенольних соединений (ФС) в биопрепаратах родиолы розовой на модели дрожжей я сравнить с результатами химического контроля.
-
Сравнить закономерности влияния препаратов из природного сырья и биомассы, полученной In vitro, на рост клеток дрожжей S. cerevlslae.
6. Разработать количественный способ определения биологической активности изучаемых препаратов (по показателе относительной адаптогенной активности, Aadapt) на дрожжах S. cerevlslae.
6. Изучить корреляцию между относительной адаптогенной активностью и иммуномодулирущим действием препаратов женьшеня я родиолы розовой.
Научная новизна
В результате изучения закономерностей влияния препаратов женьшеня и родиолы розовой на рост культуры клеток дрожжей S. cerevlslae при сниженной пролиферативной активности последней разработан количественный способ 'определения биологической активности фитоадептогенов In vitro на модели одноклеточных эукариот.
Показана возможность и проведено определение содержания биологически активных веществ в биопрепаратах женьшеня и родиолы розовой по изменению индекса пролиферации культуры дрожжей S. cerevlslae.
Выявленная положительная корреляция показателя относительной адаптогенной активности изучаемых препаратов с содержанием БАВ, определенным химическим и биологическим методами, а также показателем их иммуномодулирущей активности In vivo подтверждает правомочность использования разработанного способа для количествен-
- б -
ного биологического контроля фитоадаптогенов. Научно-практическая значимость работы
Разработанный способ позволит с учетом индивидуальной чувствительности к какому-либо фитоадаптогену объективно устанавливать курсовые дозы при использовании таких препаратов в клинической практике, в частности в онкологии. Применение его возможно при производстве данных препаратов для их биологического контроля и стандартизации. Вместе с тем предложенный способ имеет большое значение для поиска и скрининга новых Фитоадаптогенов, для которых еще не разработаны метода химического контроля биологически активных веществ, а также сложных фитокомплексов.
Апробация диссертации проведена на меклабораторной научной конференции в ОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН 20 юаня 1996 г.
Материалы диссертации доложены:
на 6-м Национальном конгрессе по раку (5-th National Cancer Congress), София, Болгария, 1993;
8-м Международном фармацевтическом технологическом симпозиуме (8th International Pharmaceutical Technology Symposium), Анкара, Турция, 1996 г.';
7-м Международном конгрессе антираковой терапии (7-th International Congress, on Anti-Cancer Treatment), Париж, Франция, 1997;
- IV-м Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство",
Москва, Россия, 1997 г.
По материалам диссертации получен патент РФ N 2062300. Опубликовано 9 печатных работ.
Структура и объем диссертации