Введение к работе
Актуальность проблемы. Лейкоз крупного рогатого скота - наи-олее широко распространенное опухолевое заболевание сельскохозяйст-гнных животных, вызываемое ретровирусом, получившим название вируса гйкоза крупного рогатого скота(ВЛКРС).
Начало заболевания протекает бессимптомно и единственным и наи-
олее постоянным признаком заражения служит перманентная продукция
тгител к антигенам вируса , а также наличие инфицированных лимфоцитов,
геном которых встроен провирус. Кроме крупного рогатого скота, в экс-
ериментальных условиях возможно развитие инфекции, вызванной
ЛКРС, у овец, коз, кроликов и других видов животных.
В Российской Федерации лейкоз распространен повсеместно. В 5 из 75 субъектов РФ уровень инфицирования крупного рогатого скота виру-зм лейкоза (ВЛКРС) составляет 10 -50% и имеет тенденцию к повышению, связи с крайне неблагополучной эпизоотической ситуацией по лейкозу и от-утствием средств специфической профилактики, особое значение приобрета-г совершенствование методов прижизненной диагностики, как основы мер орьбы с данным заболеванием.
За последние 20 лет, в связи с разработкой и внедрением в рактику серологического метода - реакции иммунодиффузии в геле агара ЭИД) для выявления инфицированных ВЛКРС животных, стало воз можным ассовое проведение диагностических исследований. Этот метод по простоте, адежности и низкой стоимости превосходит другие тесты, применяемые для иагностики инфекции, вызываемой ВЛКРС и, вместе с тем, обладает высо-ой специфичностью и воспроизводимостью.
Однако, вследствие недостаточной чувствительности РИД оздо-овление неблагополучных по ВЛКРС-инфекции хозяйств, основанное на гом методе, продолжается, как правило, в течение нескольких лет и требует роведения многократных поголовных взятий крови , что уве личивает риск іражения крупного рогатого скота ВЛКРС и снижает эффективность про-иволейкозных мероприятий. Таким образом, проблема совершенствования етодов выявления антител к ВЛКРС является актуальной.
Цель и задачи исследования. Основной целью исследований вилась разработка метода иммуноферментного анализа для выявления анти-гл к вирусу лейкоза крупного рогатого скота.
Для достижения поставленной цели было необходимо решить сле-ующие задачи:
- отработать оптимальные условия изготовления антигена вируса лейко-1 для использования в иммуноферментном анализе;
отработать условия выявления антител в сыворотке крови и секрет вымени крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа і испытать его на различных категориях животных;
изучить возможность применения иммуноферментного анализа дл оценки антигенной и иммуногенной активности штаммов рекомби нантноп вируса осповакцины, экспрессирующих поверхностный гликоп ротеи, ВЛКРС;
Научная новизна. Разработан способ изготовления антиген; ВЛКРС для иммуноферментного анализа с использованием бессьіворбточноі поддерживающей питательной среды для вируспродуцирующеи культурі FLK.
С помощью ИФА изучены:
- особенности гуморального иммунного ответа на индуцируемук
ВЛКРС инфекцию у экспериментально инфицированных животных;
динамика снижения титров антител в молоке в первой половине пакта ции;
соотношение титров антител в сыворотке крови и молозиве матереі и сыворотке крови их потомства;
динамика распада пассивно приобретенных колостральных антител : ВЛКРС; '
антигенные и иммуногенные свойства рекомбинантных штаммов ос повакцины.
Практическая значимость работы. Результаты проведенных ис следований использованы при разработке:
"Методических рекомендаций по определению антител к вирусу лей коза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа", рас смотренных и одобренных на заседании секции отделения ветеринари: ВАСХНИЛ, М., 1983 г.
НТД на опытную партию набора для серологической диагностики лей коза крупного рогатого скота (Технические условия, Временная инструкци по изготовлению и контролю), утвержденных Главным управлением ветеринг рий МСХ СССР, 1985 г.
Стандарта СЭВ "Диагностика лейкоза крупного рбґатого скота" 1987 г
Лабораторного регламента изготовления и контроля диагностическог набора для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота ме тодом иммуноферментного анализа, утвержденного директором ВИЗЕ 1988г.
Авторского свидетельства №1582395 "Способ получения антигена вк руса лейкоза крупного рогатого скота", зарегистрированного'в Госреестр изобретений СССР 1 апреля 1990г., приоритет от 26 января 1989 г.
Правил по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота, утвержденных приказом министра сельского хозяйства и продовольствия РФ , регистрационный № 1799 ,1999 г.
Методических рекомендаций по диагностике лейкоза крупного рогатого скота 2000 г. ' ''
Положения, выносимые на защиту: :!
метод иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота;
результаты испытания метода ИФА. '."
Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации
доложены на координационных совещаниях по проблеме 0.69.05 ''"Лейко
зы", Москва, 1982 и 1984 гг.; конференции Эстонской ССР "Ветеринарные
проблемы индустриального животноводства", Тарту, 1983 г.; Всесоюзной
конференции "Иммунология и иммунотерапия лейкозов человека и живот
ных", Самарканд, 1984 г.; годичной отчетной сессии ВАСХНИЛ, Москва,
1984 г.; Всесоюзном семинаре "Иммуноферментный метод в ветеринарии и
животноводстве", Москва, 1984 г.; экспозиция
ВДНХ,"Биотехнология",1991г., научно-практической конференции "Ретрови-
русные и прионные инфекции животных", Москва, 1995 г.; экспозиции ВВЦ
"Ветеринарная наука - производству", 1999 г.; научно-практической конфе
ренции "Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейко
зами сельскохозяйственных животных и птиц", Екатеринбург, 2000 г. ;;";
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 науч
ных работ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 176 страницах машинописного текста, иллюстрирована 3 рисунками и 19 таблицами. Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований , обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы, включающий 338 источников, из которых 273 иностранных и приложение, содержащее документы, подтверждающие практическую ценность отдельных этапов работы.