Введение к работе
Актуальность темы.Бруцеллез сельскохозяйственных животных наносит большой экономический ущерб животноводству Республики Казахстан. Кроме того, высока заболеваемость людей, так или иначе связанных с животноводством. Своевременное выявление я изоляция больного скота является одним из главных# факторов в системе ветеринар-но-санитарньх мероприятий, направленных на оздоровление хозяйств от этой инфекции.
Наиболее достоверным методом диагностики остается бактериологический анализ. Выделение культуры бруцелл является бесспорным доказательством наличия бруцеллезной инфекции, но в тоже время отрицательные результаты бактериологических исследований не могут слузгать достаточным основанием для исключения заболевания. К тому же, этот метод не применяется для массовых исследований животных в связи с большой трудоемкостью, высокой стоимость», длительностью опытов и наблюдений, прётпествующих получению результатов.
Разработка эффективных экспресс-методов обнаружения антигенов
бруцелл в биологическом материале и объектах внешней среды требует
наличия однородных, высокоаффинных антител, имеющих специфичность
к определенней детерминанте возбудиееля (. I.Grelser-Wilke et al. ,
I98b; V.Limet et al. , І9И7 ). Возможность получения іаких антител
доказана в 1975 году G.Kdhler and C.Milstein . Моноклиналь-
ные антитела С МКА ), синтезируемые клетками одного и того же клона ( штамма ) клеток, полученные методом гибридомной техники, имеют одинаковые физико-химические свойства и равную специфичность к определенной детерминанте антигена.. Другими словами, МКА, это достаточно чистое химическое вещество, а не гетерогенная смесь, изменяющаяся о каждым иммунизированным животным или с каждой порцией крови одного и того же организма. МКА гомологичны, поэтому пробле-
- Ц -
ма перекрестных реакций становится менее острой, чем в иммунологических тестах с обычной поликлональной сывороткой.
В этой связи МКА могут служить идеальным "инструментом'' в разработке новых и совершенствовании существующих методов диагностики бруцеллеза.
Цель- работы.Получение гибридных клеток,продуцирующих МКА к детерминантам бактерий рода Brucella и разработка на их основе экспресс-методов обнаружения антигенов бруцелл в биологическом материале.
Задачи исследования:
I.Получить штаммы гибрид-ом-продуцентов МКА против полисахарид-ных антигенов бактерий рода Brucella .
2.Изучить иммунохимические свойства полученных МКА.
3.Разработать методы обнаружения бруцеллезных антигенов в твердофазном иммуноферментном анализе ( ИФА ) и реакции латекс-агглютинации ( РЛА ) на основе использования МКА.
4.Определить эффективность предлагаемых экспресс-методов диагностики бруцеллеза на материале, полученном от экспериментально и спонтанно зараженных животных.
Научная новизна.Получены два штамма гибридом,продуцирующих МКА к полисахаридным антигенам бактерии рода Бруцелла и дана характеристика их свойств.
Разработаны и испытаны экспресс-методы индикации антигенов бруцелл в ИФА и РДА на основе использования МКА, позволяющие получить результаты за 3 - 3,5 часа. Создан "Набор для диагностики бруцеллеза методом ИФА на основе моноклональных антител".
Практическая значимость.По материалам исследований разработаны Технические условия ( ТУЛП 10.05.4000.326-92 ) на "Набор для диагностики бруцеллеза методом ИФА на основе\моноклональных антител" и Наставление по постановке и учету ИФА для экспресс-обнару-
- 5 -жения антигенов бруцелл в патологическом материале методом Й$А на основе моноклинальных антител, которые утверждены Главным управлением ветеринарии Республики Казахстан от 8 декабря 1992 года.
Основные положения,выносимые на защиту:
-Антигены бруцелл, находящиеся в прижизненном и посмертном биологическом материале могут быть идентифицированы с помощью МКА.
-Экспресс-методы обнаружения бруцеллезных антигенов в биологическом материале с помощью И$А и Р1А на основе МКА.
Апробация. Основные результаты доложены на Всесоюзной научной конференции по сельскохозяйственной биотехнологии (. Целиноград, 1991г.); научно-производственной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов Целиноградского ( ныне Акмолинского ) СХИ, 1991 - 1992 г.г.; конференции "Научные достижения молодых ученых я специалистов - животноводству" ( Семипалатинск , 1991 г.); расширенном заседании сотрудников ветеринарного факультета и биотехнологического центра Акмолинского СХИ, 1993 г.
Публикации. Но теме диссертации опубликовано 12 научных работ.
Обьем и 'структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, результатов, обсуждения, выводов,практических предложений, списка литературы и приложения. Работа содержит 12 таблиц, 3 фотографии. Список литературы включает Г/8 источников, в том числе 93 иностранных авторов.