Введение к работе
Актуальность проблемы. Клеточные линии, ведущие происхождение как от нормальны:-:, так и от опухолевых тканей, существуют ухе более тридцати лет. Кариотипическая структура клеточных линий отдичаетля от набора хромосом исходного вида кивстного. 3 качестве основной причины эволюции клеток пєревиБзеї.ї-іхлинип рассматривается процесс адаптации к условиям существования in vitro. Поскольку условия культивирования из-за нестандартности питательных сред, сывороток, применения различных методов культивирования и т.п. своеобразны в каэдой лаборатории,одна и та ке клеточная линия мокет приобрести различные сзсйства и характеристики, в том числе и измененную структуру кариоткпа.С целью получения адекватных результатов исследования целесообразно пользоваться хорошо охарактеризованными эталонными клеточным! линиями, хранящимися в специализированных коллекциях.
Многие из современных подходов к разработке иммунобиологических препаратов, при которых используются модификации традиционных методов или новые биологические приемы, включая методы генной инженерии, связаны с применением перевиваемых клеточных линий. Использование клеточных линий для этих целей основано на системе посевных серий и банков рабочих клеток изготовителя, которые должны быть полностью аттестованы в соответствии с требованиями ВОЗ. Одним из основных требований, предъявляв;.-нх к клеткам субстратам , является стабильность есєх параметров, по которым они охарактеризованы,в том числе и цитсгенетических, на протяжении всего периода использования клеток.
КУЛЬТУРЫ КЛеТОК СИРИЙСКИХ ХОМЯЧКОВ ВНК-21 (с-13), НаК, CER
относятся к наиболее часто применяемым в вирусологических исследованиях перевиваемым линиям клеток. Это объясняется их высокой чувствительностью к широкому спектру вирусов, а именно, к поксвирусам, герпесвирусам, аденовирусам, пара- и ортомиксо-вирусам, альфавирусам, пикорновкрусам, рабдовирусам и другим.
Б настоящее время за руоеком клеточная линия внк-гі(с-із) имроко используется при производстве вакцин против вирусов ящура, японского энцефалита, бешенства, синего языка овец, везикулярного стоматита и аденовируса серотипа 2. Обсуждается возможность применения этой перевиваемой клеточной линии з качестве субстрата для производства субъединичных вакцин на основе вируса осповакцины. Однако, ни в отечественной, ни в зарубежной литературе нет полного онтогенетического описания культур клеток сирийского хомячка, выполненного с применением методов дифференциальной окраски хромосом. Такав не изучено, каким образом монет изменяться кариотппическая структура клеточных линий в процессе их культивирования.
Цель работы. Целью настоящей работы являлось проведение паспортизации клеточных линий сирийского' хомячка нак, czr, знк-2і(с-із) и ее клонов, имеющихся в коллекции ВНИИ МБ; выявление касиотипических особенностей различных сублиний вн:<-21(с-13), имеющихся в коллекции ВНИИ Ш; определение закономерностей изменения кариотипа клеточных линий сирийского хомячка в культуре; изучение устойчивости кариологических характеристик производственного штамма клеточной линии внк-гі(с-із) при длительном культивировании в различных условиях с целью дать рекомендации к ее использованию в Оиотехкологических разработках.
Научная новизна и практическая значимость. В настоящей работе впервые проведено полнее онтогенетическое исследование клеточных линий сирийского хсмячка, выполненное с применением различных методов дифференциальной окраски хромосом. Выявлены различия в структуре кариотипа семи сублиний внк-2і<с-із) и была обоснована необходимость проведения полного карислогического контроля клеток производственного штамма внк-2і(с-із) на этапе изготовления эталонных заморозок клеток культуры. Выявлены за-
КОНОМерНОСТИ 3 ИСІЛеНЗКІЇЛХ КЕрИОТКПа КЛеТОК КУЛЬТУРУ ЕНК-21(с-13)
Изучение устойчивости карио.поглческих характеристик суспензионного производственного штамма внк-2і(с-із) при длительном культивировании в различных условиях показало, что структура кариотипа данной культуры остается стабильной лишь при условии, что культивирование проводится при строго регламентированных условиях в ферментерах.
Публикации и апробация работы. По материалам диссертации опубликована статья, этот материал представлен также в " Каталоге перевиваемых культур клеток " т.2 (деп. ВИНИТИ, 19S8). Результаты работы докладывались на Всесоюзной конференции " Генетика соматических клеток" (Звенигород, 198эг.) и з-м Всесоюзном совещании " Культивирование клеток животных и человека" (Путино, 1990Г.).
Структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на *So страницах машинописного текста, включая 47 рисунков и з таблицы.