Введение к работе
Актуальность проблемы. Достижения биотехнологии позволили
современной медицине суїцсстисіїно расширить диагностические
возможности. Наибольшее распространение получили
нммуноаиалнтическне методы. Гнбридомная технология получения антител привела к возможности создания множества диагностических тест-систем, обладающих высокой чувствительностью и специфичностью. Разработка количественных лабораторных методов, экспресс-анализов с использованием моноклоиальных антител для медицинской диагностики является важной задачей современной биотехнологии.
Для лечения эндокринных заболеваний и в частности заболеваний щитовидной железы очень важна правильная своевременная диагностика патологии. Очевидно, что рост этих заболеваний не в последнюю очередь связан с ухудшением экологических условий. Для полной оценки тпроидпбго статуса необходимо учесть концентрацию всех гормонов, связывающих белков, аутоантител И других факторов, участвующих в регуляции работы щитовидной железы. Для первичной оценки достаточно знать концентрации в крови тироксина и тиротропина. В настоящее время для измерения концентрации тироксина применяют в основном нммуноаналитическис методы. Огромное 'значение для успешного применения . этих методов имеет качество используемых антител. Антитела должны обладать высокой специфичностью и аффинностью к тироксину, поэтому использование моноклоиальных антител намного предпочтительней, чем использование, поликлональных. Кроме того, явные преимущества имеют методы, применимые для проведения массовых анализов в клинике: они не должны быть длительными, трудоемкими, напротив, должны быть просты в исполнении, использовать малый объем крови', не требовать предварительной обработки пробы. -
Целью данной работы является создание количественных
иммуноферментных методов определения тироксина с использованием
моноклоиальных антител. При выполнении работы были поставлены
следующие задачи: выбор оптимальной стратегии анализа; изучение
влияния гаптенной , гетеролегии на характеристики
иммунометрического анализа; изучение условий, обеспечивающих разрушение комплексов тироксина со связывающими белками.
Научная новизна. Изучены возможности использования моноклоиальных антител к тироксину ІВ7 в твердофаз7Шх методах определения тироксина,, основанных на.принципе прямой и непрямой ELISA. Разработан иммунометрический метод определения общего тироксина в сыворотке крови на основе моноклоиальных антител
Изучено влияние гперологии на чувствительность и специфичность
ііммунометричсскоіо метода. Разработан одностадийный
иммунофсрмснтньїіі метод определения общею тироксина на іч'шше моноклона чьпых антител с использованием аффекта гашенной гетсрологии.
Практическая .значимость работы. Тема диссертационной работы является темой, утвержденной и финансировавшейся Мнннстсрстном Здравоохранения и Министерством но Чрезвычайным Ситуациям МТ4-ТЕСТ". В данной работе создана тест-система для количественного определения концентрации тироксина н сьмюроіке крови на основе моноклопальных антител, которая позволяет пронести анализ за 30 минут, использовать малый объем крови (достаточно, брать кровь у больных из пальца), проста в исполнении. Разработанный метод но споим характеристикам не уступает лучшим зарубежным аналогам, являясь при зтом более экономически выгодным. Метод опробован на банке сывороток (80 штук), любезно предоставленном Институтом Экспериментальной Эндокринологии Эндокринологического І Іаучного Центра РАМП. В настоящий момент разработаны и утверждены медико-технические требования, технические условия и регламент для производства опытной парши тест-систем с целью их дальнейшего промышленного производства.
Положения, выносимые на защиту.
!. Разработка нескольких вариантов нммуноанализа тироксина с использованием моноклоналытых антител 1В7.
-
Разработка оригинального метода нммуноанализа тироксина с использованием гаптепной гетсрологии.
-
Разработка метода очистки донорской сыворотки от тироксина с целью дальнейшего приготовления стандартных разведений тироксина.
Апробация работы. Диссертация апробирована на заседании Ученого совета Института биотехнологии 24 мая 1995 г. Материалы диссертации были представлены на II Всероссийском конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1995) и V съезде специалистов по лабораторной диагностике (Москва, 1995).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 3 тезисов докладов.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы из 105 источников. Работа изложена на 96 страницах и содержит 13 рисунков и 2 таблицы.