Введение к работе
Актуальность проблемы. Промышленному птицеводству значительный экономический ущерб наносят вирусные заболевания. Особое место в списке этих заболеваний занимает болезнь Марека СБЮ -злокачественный лимфоматоз, возбудителем которого является ДНК-содержащий вирус болезни Марека СВБМ). отнесенный к семейству герпесвирусов.
БМ регистрируется практически во веек странах мира с развитым промышленным птицеводством, характерным для болезни является быстрое распространение инфекции среди восприимчивого поголовья. Заболевшие птицы теряют в весе, задерживается их рост, нередко происходит падеж от БМ. что приносит огромный экономический ущерб.
ВБМ имеет сероварианты трех типов.' Серотип 1 включает все вирусы, способные вызывать лимфомы у птиц, и аттенуированные его варианты. К серотипу 2 ВБМ относят все неонкогенные вирусы герпеса кур СВПО, а к серотипу 3 - антигенно родственные ВБМ апатоге-ные, неонкогенные вирусы герпеса индеек СВПО.
Ведущим звеном в системе организации профилактических мероприятий при БМ является эпизоотическая характеристика птицехо-зяйств СКоровин Р.Н.. 1989), основанная на точной и своевременной диагностике заболевания. Правильный выбор подходящей по своим иммунизирующим свойствам вакцины для данного птицехозяяства способен исключить ВСПЫШКИ БМ.
Долгие годы превалирущее значение в профилактике болезни Марека имела вакцина на основе ВГИ. Первая отечественная вакцина против БМ также создавалась из третьего серотипа ВБМ - штамма FC 12S. С>щсТосНмшй вклад в разработку нативной и сухой вирус-вакцины внесли ученые ВНИТИБП Лукина В.А. с сотр., Токарик. Э.Ф. с сотр., слепенко Т.Б., Блехерман Б.Е., марыгина А.Ф. и др.
вакшна на основе вги обладала высокой эффективностью в первое десятилетие после внедрения С1970-80 г. г.), но в последушие годы во многих регионах мира отмечено снижение ее протективной активности CCalnek B.W., 1992). После проведения дополнительных исследований американскими учеными С Witter R.L. et al., 1982. 1988. 1995) показано, что эффективность серотипа 3 ВБМ значительно усиливается даже против особо вирулентных ВБМ, если применять его в комбинации с вирусами серотипа 2. Определенные различия между антигенными детерминантами серотипов ВБМ позволяет определять в сыворотке крови кур наличие или отсутствие специфических антител к вакцинному или полевому ВБМ. что дает возможность судить и о качестве поствакцинального процесса ccato s. and Нігаї К.. 1985: Calnek B.W. and Witter R.L.. 1991: Ono M. et al.. 1995).
Прогнозирование поствакцинального гуморального иммунитета у привитой птицы, а также создание и применение поливалентных вакцин, в составе которых имеются актуальные штаммы ВТК. дают возможность надежно проФилактировать БМ за счет ингибирования патогенных штаммов ВБМ.
С этих точек зрения изучение гуморального поствакцинальшго иммунитета у кур, привитых мою-, би- и поливалентными вакцинами против болезни Марека представляется своевременным и обоснованным.
Цель и задачи исследования. Цель работы - изучить особенности поствакциналъного иммунитета у кур, привитых моно-, би- и поливалентными вакцинами против БМ. по динамике антител класса igG, реагирующих с различными антигенными детерминантами серотипов ВБМ
В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:
-
Синтезировать высокостабильный иммунопероксидазный конъкь гат анти-lgG желтка яиц кур, облалащий антивидовой активностью.
-
Разработать варианты ифа с использованием вги, стабилизированного в безбелковой среде, для оценки биологической активное-
ти вакцины против БМ.
-
Разработать модификации ИФА для идентификации антигеннім детерминант и серовариантов ВБМ. диФФиренциаши антител к ним.
-
Изучить с помощью ИФА развитие поствакцинального гуморального иммунитета у кур, привитых моно-, би- и поливалентными вакцинами против БМ по динамике иммуноглобулинов класса G и дать оценку эффективности вакцинных штаммов и вирусвакшн.
Научная новизна работы. Разработан способ выделения иммуно-химически чистого препарата IgG желтка яиц кур савторское свидетельство N 1497811). на базе IgG синтезирован активный иммунопе-роксидазный антивидовой конъюгат санти-IgG кур), пригодный для разработки и проведения различных модификаций ИФА.
Разработан способ стабилизации вируса герпеса индеек, на который получено положительное решение сприоритетная справка N 5015791).
Разработаны методы выделения ВТК от невакцинированных птиц благополучного по БМ птицехозяйства, идентификации и поддержания вируса в культуре клеток эмбрионов SPF-кур.
Впервые в России выделены и идентифицированы штаммы вируса герпеса кур. Два из них, под номерами "42" и "50". депонированы в ВГНКИ как производственные вакцинные штаммы и используются для изготовления поливалентной вакцины против БМ С патенты N 2085582. N 2085583).
Разработана методика оценки эффективности вакцинации по определению серологического статуса птицы, привитой против БМ.
Практическая значишсть работы, в результате проведенных исследований разработаны и утверждены:
- Методические рекомендации для количественного определения морфологически зрелых иммунохимически активных вирионов методом твердофазного ИФА (утверждены директором ВНУПЖП в 1991 г.):
,- 4 -
Методика количественного определения антигенно-активны клеток в жидкой вакцине против БМ на основе шт. ГС-128 ВГИ методом ИФА с утверждена директором ВНИТИБП в 1932 г.э:
Методика определения серологического статуса вакцинированной против БМ птицы с целью оценки качества сукой вакцины методом ИФА с утверждена директором ВНИТИБП в 1992 г.):
Методические рекомендации по оценке эффективности сухой I жидкой вакцины против БМ и определению серологического статусе вакцинированной птицы С утверждены директором ВНИТИБП в 1993 г.):
Методические рекомендации по выделению и поддержанию апа-тогенных вариантов вируса герпеса кур Сутверждены директорок ВНИТИБП В 1997 Г.).
Разработанные Методические рекомендации легли в основу Временной инструкции по изготовлению и контролю набора для оценю* биологической активности вакцин против БМ иммуноферментным методом. Технических условий на набор. Временного наставления по применению набора, нтд на набор согласована директорами ВНИТИБП v ВГНКИ и утверждена Ветеринарном департаментом РФ 23 июня 1997 г.
Разработанные наборы прошли с положительным эффектом испытания на ГЩБК, курской биофабрике, во ВГНКИ и птицефабриках.
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 20 печатных работ. Получено 1 Св соавторстве) автор ское свидетельство, 2 патента и 1 положительное решение по заявке
Апробация работы, материалы работы и ее отдельные разделы доложены: на 5-той конференции молодых ученых и специалистов сельского хозяйства (Москва, 1986 г.): Всесоюзной научной конференции молодых ученых СМосква, 1988 г.): научно-теоретической конференции молодых ученых "Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии" С Владимир, 1990 г.Э: Всероссийской научно-практической конференции (Владимир, 1995 г.): 5 Всероссийской конференции
"Научныэ основы промышленного производства ветеринарный биологических препаратов" (Щелково. 1996): Всероссийской научной конференции "Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных" СМосква, 1996), 2-ой Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринавдо-санитавдого контроля сельскохозяйственной продукции" СМосква, 1997).
Структура и объем диссертации, материалы диссертации изложены на 194 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, описание материалов и методов, результаты исследования и их обсуждение, заключают работу выводы и практические предложения. Список цитированной литературы содержит 257 источников, в том числе 81 на русском языке. Диссертация иллюстрирована 27 таблицами и 26 рисунками. В приложении С15 стр.) предстаапены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную и практическую значимость.