Введение к работе
Актуальность темы. В последние десятилетия интенсивно исследуются различные аспекты метаболизма метилотроф- " ных микроорганизмов. Эта группа организмоа, стоящая мваду '. автотрофами и гетвротрофами, привлекает внимание в сізязи о перспективностью их использования в качестве продуттентоп .: .формальдегиде, метплкетонов, ді^кскацетона, ОАД, АїФ, ка-'' талазн, алкогольоксидазы и др. /Подгорский, 1982/.'
Алкогольоксвдаза (алкоголь: кислород оксидоредуктаза; КФ 1.1.3.ІЗ) является ключевым ферментом метаболизма, меха-нолокислягащих дрожжей я может быть использована при производстве перекиси водорода и формальдегида /Tbni t{а., 1983, Типі , 1984/, моющих и отбеливающих средств /Wooct-v/ita/, 1986/, а такие в аналитических целях для определения содержания первичных спиртов в различных жидкостях.
Производство алкогольоксидазы в нашей страна пока не организовано и находится на стадии разработок. В связи о этим исследования» проводиш? с целью поиска способов направленной регуляции и интенсификации синтеза алкогольоксидазы являются актуальными.
Работа выполнена в соответствии .о постановлением СМ СССР Л 807 ст "О дальнейшей развитии новых направлений в биологии и биотехнология".
Цель и задачи ре*оть% Основной целью данной работы являлась разработка способа интенсификации процесса биосинтеза алкогольоксидазы. Исследования проводили по треи основным направлениям - поиску активного продуцента, оптимизации условий его культивирования и стабилизации активности ферментного препарата.
В работе были поставлены следующие задачг:
отобрать активный продуцент алкогольоксидазы;
оптимизировать состав питательной среда и условия культивирования продуцента, обеспечиващие высокий выход алкогольокоЕдазы;
определить условия, при которых происходит стабилизация г-стивности алкогольоксидазы;
- разработать методику анализа первичных спиртов о поыодьа адкогольоксвдазц,
Циучная новизяч, Ввделен и вдентифацирован новый шташ іібттотіофшх. дрожкей - продуцент адкогодьохсадазы Condi' da SciAfii JC3.
у Показано, что оптимальные значення уровней рН среда -
для процесса роста продуцента и синтеза фермента различны^
при этом процесс синтеза фермента более чувствителен к зто- :
му фактору, чем рост o-ioiaaocu. ...
Выявлена ранее неизвесная зависимость физиологической , активности метклотрофных дрожкей Candida Soidiru j3 от окисли: шга-восстановительного уровня среда и интенсивно- , оте аэрации в широком диапазоне значений этих факторов.
Установника, что фактором, ограшчиващим продолжительность процесса культивирования ? периодических условиях с подпиткой Во метанолу, является определенная концентрация биомассы продсцвнга, при достижении которой процес- -сы биосинтеза прекращаются.
Практическая, значимость. Безработен состав ферментационной среда, при использовании которой выход биомассы и активность алкогольохсадазы продуцента увеличиваются в 1,8 раза.
Для исследованных штампов метплбтрофннх дрозжей обос
нованы условия ведения процесса культивирования /аэрация,.,
уровни ЕД, рН, температура/, обеспечивающие стабильность и
еффектввность процесса. .
Болученн»; >з ра^29 результаты были подгверздены на ошгно-проішлшззой установке НПО "Бполар" г.Олаіно.
Из бяоізсен нового 'штамма дрокаей был выделен Е очн-чш препарат олкогольоксадазы, продлояап простой способ сто счабшшзацга. Разработана иетоддка фотометрического определения перютшх спиртов с поаацыэ аякогодьохсэдазы и состав набора роаптивов для ого проведения.
Адробтош работ Результаты работы бнлн доложена на паучаод скашара во ЕШЙ ПБ г.Олайво /ЮЗО г./..
Пуіі._ По тезе диссертациа опубликовано 5 работ.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на'// страницах машинописного текста н содержит введение, обзор литературы, изложение экспериментального материала, обсуждение результатов, виводы и приложение. Работа иллюстриро-'' вана Ю рисунками и содержит 29 таблиц. Список литературы включает 119 названий.