Введение к работе
Актуальность проблемы.
Биосинтез бэлка на -рибосомах интенсивно изучается уже более тридцати лет. Несмотря на это, из-за чрезвычайкой сложности объекта изучения существует еще множество пробелов в понимании молекулярных механизмов этого процесса. Неизвестно, б частности, какими участками и в какой последовательности молекула тРНК связывается с рибосомой в процессе трансляции. С какими элементами рибосомы она при этом взаимодействует. Происходят ли при этом какие-нибудь изменения копформации молеку.ш тРНК и рибосомы.
В связи с этим представляет интерес изучение термодинамики и кинетики взаимодействия тРНК и ее фрагментов с 70S рибосомой и ее субчастицами, что позволяет определить как центры взаимодействия молекулы тРНК с рибосомой, так и получить информацию об участках рибосомы, на которых такие взаимодействия происходят.
Основные задачи работы.
-
Разработать модельную систему, 'позволяющую изучать взаимодействие деацилироЕашюй тРНК с 50S субчастицей.
-
Изучить структуру сайтов связывания деацилированной тРНК на 50S субчастице и их связь с сайтами на 70S рибосоме.
-
Определить центры (или более протякенные участки) молекули деацилированной тРКК, которыми она связнвавтся на Р-сайте рибосом.
Научная новизна результатов. Впервые показано:
I) сайт быстрого обратимого сьязивигля деацил'/роваихэй тРНК на 50S субчастице не является частью F-сайтс или А-слПтп,
s представляет собой Е-сайт, или,по крайней мере .его часть;
-
девцилированная тРНК имеет на50S субчастице участок для связывания,помимо Е-сайта, который является частью Р-сайта;
-
в матричио-зависимом связывают деацилированной тРНК нв Р-сайте 70S рибосом принимают участие нуклеотиды G74, С75 и A7S. Измерены их вклады в стандартную, свободную энергию связывания при двух концентрациях ионов MS4"*.
-
разработана модельная система для изучения слабого и бистро обменивающегося связывания тРНК с рибосомами методом мембранной фильтрации, которая мокет быть использована при изучении свойств А- и Е-сайтов.
Полученные результаты имеют теоретическое значение для понимания функционирования 70S рибосом.
Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на 16-ой конференции ФЕБО (Москва), 10-ом Советско-французском симпоеиуме (Киев), 14-ом совещании по тРНК (Польша).
Публикации. По метериалам диссертации опубликовано три статьи и тезисы в материалах трех конференций.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 105 страница/, машинописного текста и содержит 4 таблицы и 19 рисунков. Диссертация состоит из "Введения", "Обзора литературы", "МаториалоЕ и методов", "Результатов и их обсуждения", "Выводов" и списка цитируемой литературы.