Введение к работе
Актуальность исследования. В современном мире существует жого болезней, обусловленных инфекционным началом. Эпидемическая обстановка в отношении инфекционных болезней и болезней связанных с нарушением клеточного иммунитета, з различных частях дара, включая и развитые страны, время от . времени достигает опасной напряженности. Ватаость проблемы распространения инфек-дий определяет значимость иммунологических исследований и, в їастности, исследований клеточного иммунитета.
Ва*ную роль в обеспечешга клеточного иммунитета играют по-ишорфно-ядерные. лейіїоцити (ІМП) к мононуклеарные. фагоциты. От tx деятельности зависят реакции фагоцитоза и продукция гуморальных неспецифических факторов защиты (А.Н.Мзянский, 1989). Отме-іается, что БМЛ принимают участие б опосредованных антителами йшунных реакциях организма (Р.В. Колвин, 1983). В более широком іспекте изменение функции фагоцитов наблюдается при любом повреждении тканей.
Функциональная активность фагоцитов проявляется под действием различных" стимулирующих факторов. При стимуляции клеток развивается "дыхательный взрыв", под которым понимает резкое 'силение потребления кислорода стимулированными фагоцитами. При фагоцитозе ПМЛ- и тканевые макрофаги генерируют активные формы скслорэда (АФК), которые разрушают мембраны бактерий, способствуют лизису чужеродных, объектов ливосомальЕыми ферментами и, медовательно, определяют бактерицидную активность фагоцитов.
Существует ряд методов изучения АФК: спектрофотометричес-ий, флуорометрический, биохимически"! с использованием различных химических веществ (щгаохрома С, нитросинего тетразолия, тайро-іа, адреналина)t метод электронного парамагнитного резонанса. )собое место среди них занимает хемилюминесцентный метод.
Многими исследователями показано изменение интенсивности .еїлшюшшесценции выделенных ВЩ относительно нормы при бактериальных инфекциях, неспецифических воспалительных заболеватьях. 'иперхолистеринемш, хроническом гранулематозе, дефиците миело-Еероксидазы, менингите, пиотораксе, хронической почечной недос-аточности, инфаркте миокарда и онкологических заболеваний (Van tyke К. ,1986). Дня исследования ШЛ выделяют в градиенте плот-сети с использованием различных реагентов. Однако, изучение хе-
-з-.
милюминесценции (ХЛ) фракционированных клеток связано со знач* тельными трудностями препаративного характера.
В последнее время получила распространение методика регим рации Ж цельной крови. Простота процедуры измерения дозволяє использовать эту методику в клинической практике. Недостатке этой методики является необходимость учитывать экранирующий 3 Хемилюминесцентный ответ возникает при действии на фагощп различных стимуляторов (Владимиров Ю.А., 1989). Все они вызывай: вспышку ХЛ. Тем не менее, следует указать, что стимуляция фаге цитоза , плохо поддается стандартизации, что, в свою очередь ухудшает воспроизводимость хемилюминесцентных измерений. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы был разработка простой и удобной для клинического применения метода ки регистрации ХЛ фагоцитов цельной периферической крови, дающе возможность оценивать их способность генерировать активные фор^ ішслорода. Для достижения указанной цели требовалось решекк следующих задач: разработать способ стимуляции-фагоцитов цельной крови позволяющий достаточно просто, быстро и с хорошей воспроизводи мостью определять их способность генерировать активные форм кислорода; ' исследовать основные особенности генерации ХЛ фагоцитам цельной крови, при их. стимуляции кристаллами сульфата бария; изучить стимулированную кристаллами сульфата бария X фагоцитов цельной крови больных некоторыми острыми и хронически ми воспалительными заболеваниями.. Научная новизна работы. Впервые разработана и предложен для клинического применения методика регистрации стимулирование кристаллами сульфата бария ХЛ фагоцитов цельной крови. Изучен основные особенности, -генерации ХЛ фагоцитами цельной, крови присутствии кристаллов сульфата бария. Прозеден корреляционны анализ меаду амплитудой вспышш ХЛ и клинико-лабораторными пока зателями. Показано увеличение амплитуды вспышки ХЛ фагоцито цельной крови при ряде острых и хронических воспалительных забо леваний. Практическое значение работы. Предложен новый класс стимуляторов фагоцитоза - труднорастворимые кристаллы сульфата бария. Применение этого стимулятора значительно упрощает использование хемшпоминесцентного метода для изучения функциональной активности фагоцитирующих клеток. Разработана методика регистрации люмк-пол-зависимой хемилюминесценвди фагоцитов цельной крови, позволяющая определять степень активности воспалительного процесса, например, при ревматоидном артрите, ювенильном ревматоидном артрите, флегмонах, а так ле контролировать эффективность проводимых лечебных мероприятий. Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на XVII Симпозиуме Европейского общества остеоартрологов (Будапешт, 1988), IV научной конференции молодых ученых НИИ физико-химической медицины Ш РФ, VI Всеросийском съезде дерчатологов и венерологов (Москва, 1989), Международной научной конференции "Школа академика А. И. Черкеса: идеи, развитие, перспективы" (Киев, 1994), Международной конференции: "Клиническая хемилюмпнесценция" (Берлин, 1994), конференции отдела биофизики НИИ физико-химической медицины МЗ Российской Федерации. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ. Получено 2 авторских свидетельства на изобретения. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста, вівдзчая 29 рисунков и 9 таблиц. Состоит из введения, обзора литературы, методической части, экспериментальной части, обсуждения результатов и выводов. Библиографический указатель содержит 131 источник.