Введение к работе
Актуальность проблеми.
Для лечения многих кокных заболевания, таких как псориаз
lertaux et al- 1981] , КОЖНЭЯ Т-КЛЄТОЧНаЯ ЛИМфОМа CFdelson
)&7] И ДРУГИХ CRaok et аі. 1990] В КЛИНИК9 уСПвШНО ЩЖМЄНЯОТОЯ
У-ІА-терапия - комбинированное воздействие псориланов ї>урокумаринов) и ближнего УФ-А-излучения (320 - 400 нм).
Считается, что фурокумарини в коже ведут два вида отохимических реакций. Первый вид фотореакций не нуждается в рисутствии кислорода и в ходе таких реакций фурокумарини гшалентно фотоприсоединяются к пиримидиновым основаниям
УКЛвИНОВЫХ КИСЛОТ, И НеНаСЩеННЫМ ЖИРНЫМ КИСЛОТаМ rRodiahiero et
і.. 1988]. Фотохимические реакции фурокумаринов второго вида вляются кислород-зависимыми и мишенью фотоокислительных одификаций служат мембраны клеток и некоторые компоненты
ИТОПЛаЗМЫ CPotaoenko et аі- 19901 . ВКЛЭД ЭТИХ 2-Х ВИДОВ реЭКЦИЙ В
ерапевтический эффект до конца не ясен. Есть косвенные указания а то, что реакции 1-го вида ответственны за терапевтические
ФфЭКТН CEdelson et al. 1991] -, ТОГДЭ КЭК фОГбОКИСЛИТвЛЬНЫе рваКЦИИ
-го вида приводят к побочным, токсическим эффектам, например,
рИТВМе CAverbeck 1989] . ОДНЭКО, МОГУТ ЛИ рваКЦИИ 2-ГО ВИДЭ
бладать терапевтическим-действием, не известно.
В последнее время возникло предположение, что . в основе еханизма ПУФА-терапии может лежать иммуномодулирувдае действие урокумаринов в комбинации с УФ-А-излучением на организм. Так, звестно, что ПУФА-воздействие способно ингибировать реакции гаїерчувствительносга замедленного типа (ГЗТ) и контактной
ИПерчуВСТВИТеЛЬНОСТИ (КЧ) [Aubin et лі. 1991] . КлвТКИ
ангерганса, являющиеся антиген-презентирущими клетками в коже,
ЛУКЭТ ПерВИЧНОЙ МИШеНЬЮ При Проведении ПУФА-ТераПИИ CAlcaUv »t
і. 19893 . Есть указание на то, что супрессирукщие гффекты ПУФА а реакции ГЗТ и КЧ обусловлены прямым фотоповреждением
НТИГвН-ПрезеНТИруЩИХ КЛеТОК CMorisor» et al. 19811 ИЛИ ИНДУКЦИбЙ
УПреССОрНЫХ Т-КЛ6Т0К [Perez et al, 1989] При ПУФА-В03ДЄЙСТВИИ.
днако, влияние продуктов фотоокисления на реакции ГЗТ я КЧ не зучалось.
В литературе, в основном, оценка эффектов ПУФА-воздействия но агоцитнрувдиэ клетки проводилась с использованием одного теста:
увеличении проницаемости их мембран для красителя трапановок
ОИНЬГО [Meffert et al. 198П ТОГДЭ К8К НЭ ВаЖНбЙШИЭ ЭффвКТОрШв
Функции фагоцитов, например, гэнерацюо последними активных фор кислорода, влияние ПУФА-воздэйствия вообще не исследовалось.
Для изучения биологически активных фотопродукго: фурокумаринов удобным объектом исследования являются эритроциты Ьшю показано, что фотосенсибилизированный фурокумаринам
фОТОГемолИЗ Ha 100 НуКДаеТСЯ В ПРИСУТСТВИИ КИСЛОрОДа CPotaoenko et al., 1986] . Т.О. фОТОГеМОЛИЗ ЯВЛЯЄТСЯ МОДЭЛЬЮ ДЛЯ ИЗУЧбНИ
именно фотоокислительных реакций фурокумаринов.. Кроме того, был обнаружено, что для индукции повреждения эритроциты не обязательн облучать в присутствии фурокумаринов. Можно ггредварительн фотоокислить сами фурокумарини в отсутствие эритроцитоЕ Добавление к клеткам продуктов такого фотоокисления вызывав
ГеМОЛИТИЧеСКИЙ ЭффеКТ [Potacenko et al., 19883
Было выявлено, что свойства продуктов . фотоокислет
фУрОКумарИНОВ В ЭТаНОЛв (Ф0Пэт) CPotaeenko et al.. 19881 И
водных растворах (ФОПц) cvedaidi et «к i988] существен*
отличаются. Если свойства продуктов Ф0Пзт бали деталью охарактеризованы, то продукты ФОП^ практически не изучены.
Цель и задачи исследования.
Цель работы: изучение токсических и иммуномодулируквд
СВОЙСТВ ПРОДУКТОВ фОТОЛИЗа фуроКУМарИНОВ in vivo И in vitro .
Всвязи с этим поставлены следующие задачи:
1. Изучить мембрано-токсические эффекты ФОПц на эритроцит!
человека и перитонеальных фагоцитах крыс.
2. Исследовать влияние' ПУФА-воздействия на способное
фагоцитов генерировать активные формы кислорода. Изучить ро.
фотоокислительных реакций фурокумаринов- и различных продукті
фотоокисления фурокумаринов в этом процессе.
3. Исследовать иммуномодулирующее действие продукт'
фотоокисления фурокумаринов на штотных на примере реакц
гиперчувствительности замедленного типа.
Научная новизна работы.
Показано, что при фотоокислении псоралене в этанольн растворе образуется два типа фотопродуктов: ' разрушаемые вод «tOIlj) в не разрушаемые водой (0). Продукты типа 0
р'еждают как мембраны эритроцитов, так и мембраны фагоцитов: в чае эритроцитов фотопродукты типа $OHj вызывают гемолиз, в чае фагоцитов - индуцируют каналы проницаемости для трипанового его и иягибируют продукцию фагоцитами активных форм кислорода К). Продукты типа ФОП? также обладают биологическим действием оба типа клеточных мембран. Эти фэгопродукты увеличивают ницаемость эритроцитарных мембран, но не изменяют проницаемости коцитаршх мембран. При низких концентрациях продукты типа 0 ывают активацию продукции фагоцитами АФК.
Обнаружено, что фотопродукты 0 обладают иммуномодулирупцим ствием in : при малых концентрациях они вызывают активацию кции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к троцитам барана (ЗБ) у мышей, при больших - ее ингибирование. ^полагается, что, иммуномодулирующие эффекты ФОП могут ществляться за счет изменения активности антиген-презентирущих ток (АЖ).
Продукты-гемолитики типа ФОГ^ образуются в ходе 2-х фотонной ікции, где первый фотон поглощается молекулой псоралена, а затем рой фотон поглощается лабильным фотопродуктом А*.
Практическая значимость.
В терапии дерматозов используется УФА-излучение относительно «ой интенсивности (менее 80 Вт/м2), В настоящей работе іаружено, что ПУФА повреждение АПК (макрофагов и ПМН) резко ивируется при повышении интенсивности УФА-излучения до 180 'иг. Т.к.считается, что АПК являются первичной мишенью 'охимических реакций псораленов и модификация АПК может служить ювой терапевтического эффекта, можно предполагать, что їличение интенсивности при проведении' ПУФА-терапии дерматозов іволит резко увеличить эффективность лечения.
Апробация работы.
Основные положения диссертации обсуждались на ш и іи стрессах Европейского фотобиологического общества (Будапешт S9, Амстердам 1991), школе молодых ученых "Свободные радикалы в ии, биологии и медицине" (С.-Петербург 1991), на заседаниях )эдры биофизики и кафедры медицинской и биологической физики, хийского Государственного Медицинского Университета.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 4 печатних работы.
Обгеи диссертации.
Работа изложена на 169 страницах машинописи и состоит введения (3 стр.), обзора литературы (47 стр.), описания ма риалов и методов исследования (6 стр.), излокэния полученных зультатов и их оОсувдения (70 стр.), заключения (4 стр.'), выво и библиографического указателя. Работа содержит 35 рисунков, таблица, список цитированной литературы (244 источника).