Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современные представления о патогенезе рака молочной железы 14
1.1. Гистологическая характеристика рака молочной железы человека и химически индуцированного рака молочной железы у лабораторных животных 14
1.2. Морфологические изменения лимфатических узлов при канцерогенезе 17
1.3. МикроРНК: образование, функциональная значимость, участие в патогенезе различных заболеваний и опухолей 20
1.4. Химиотерапия рака молочной железы 31
1.5. Оперативное лечение рака молочной железы 35
Собственные исследования
Глава 2. Материал и методы исследования 39
2.1. Характеристика экспериментальных групп животных. Индукция экспериментальной опухоли молочной железы и способы лечения, используемые в эксперименте 39
2.2. Методы патоморфологического исследования 40
2.3. Методы молекулярно-биологического исследования молочной железы, опухоли молочной железы, сыворотки крови и лимфы 43
2.4. Методы статистической обработки данных 46
Глава 3. Патоморфология химически индуцированного рака молочной железы 48
3.1. Верификация опухоли молочной железы, индуцированной введением N-метил-N-нитрозомочевины 48
3.2. Морфологический анализ подмышечных лимфатических узлов I порядка при экспериментальном раке молочной железы и различных методах лечения. 52
3.3. Морфологический анализ брыжеечных лимфатических узлов при экспериментальном раке молочной железы и различных методах лечения 67
3.4. Морфологический анализ передних средостенных лимфатических узлов при экспериментальном раке молочной железы и различных методах лечения . 82
Глава 4. Оценка количества микроРНК и корреляционных взаимосвязей с параметрами архитектоники 99
4.1. Количество микроРНК в ткани молочной железы в норме и при химически индуцированном раке молочной железы с учетом проведенного лечения 99
4.2. Количество микроРНК в сыворотке крови в норме и при химически индуцированном раке молочной железы с учетом проведенного лечения 100
4.3. Количество микроРНК в лимфе в норме и при химически индуцированном раке молочной железы с учетом проведенного лечения 102
4.4. Анализ корреляционных взаимодействий между микроРНК 105
4.5. Корреляционные взаимосвязи параметров цитоархитектоники лимфатических узлов и количества микроРНК 107
Глава 5. Обсуждение результатов исследования 133
Заключение 155
Выводы 158
Список литературы 161
- Гистологическая характеристика рака молочной железы человека и химически индуцированного рака молочной железы у лабораторных животных
- Верификация опухоли молочной железы, индуцированной введением N-метил-N-нитрозомочевины
- Морфологический анализ передних средостенных лимфатических узлов при экспериментальном раке молочной железы и различных методах лечения
- Корреляционные взаимосвязи параметров цитоархитектоники лимфатических узлов и количества микроРНК
Гистологическая характеристика рака молочной железы человека и химически индуцированного рака молочной железы у лабораторных животных
Частота встречаемости рака молочной железы (РМЖ) у женщин развитых стран превышает 10%, среди общего населения в этом плане особенно выделяются пожилые женщины, что является одной из основных причин увеличения количества онкологических больных (Кулигина Е.Ш., 2010).
Известно, что опухоли молочной железы могут развиться из базального (миоэпителиального) и люминального эпителия, которые различаются между собой экспрессией специфических цитокератинов (Стенина М.Б., Фролова М.А., 2011). Закладка эпителиальных клеток молочных желез происходит в период эмбриогенеза. Дальнейший рост и дифференцировка клеток эпителия осуществляется в пубертатном периоде, развитие эпителиальных клеток молочной железы заканчивается во время беременности и лактации (Visvader J.E., 2009).
Эпителиальная иерархия клеток молочных желез начинается с недифференцированной стволовой клетки, которая способна дифференцироваться в прогениторные клетки (рис. 1). Люминальные прогениторные клетки экс-прессируют на мембране белок интегрин 3 (CD61). Данные клетки способны дифференцироваться в зрелые протоковые и альвеолярные, которые относятся к люминальному эпителию, обладающему секретирующими свойствами (Asselin-Labat M.L., 2007; Sleeman K.E., 2007). Базальные прогенитор-ные клетки экспрессируют на мембране (CD24+CD29hi, CK14+CK19) и способны дифференцироваться в базальные клетки, которые относятся к мио-эпителиальным клеткам, экспрессирующим специфичные для гладкомышеч-ных клеток цитоскелетные и контрактильные белки. В то же время базальные клетки имеют характеристики эпителиальных клеток, в частности, базальные клетки экспрессируют цитокератины (CK5, CK14, CK17) и Р-кадгерин (Стенина М.Б., Фролова М.А., 2011; Shackleton M., 2006; Visvader J.E., 2009). Рак молочной железы является гетерогенным заболеванием как на гистологическом, так и на молекулярном уровнях. На основании методов молекулярного анализа выделяют следующие типы РМЖ: ER+ (экспрессия рецепторов к эстрогену-альфа) и/или PgR+ (экспрессия рецепторов к прогестеро-ну)/Her-2/neu-(экспрессия рецепторов к эпидермальному фактору роста человека) в сочетании с низким индексом пролиферативной активности Ki-67 – люминальный А тип; ER+ и/или PgR+/Her-2/neu- в сочетании с высоким индексом Ki-67 или ER+ и/или PgR+/Her-2/neu+ или Her-2/neu+:ER-/PgR+/Her-2/neu+ – люминальный В тип; ER-/PgR+/Her-2/neu- и/или СК5/6+ EGFR:claudi – низкий – базальноподобный (triple-negative).
Фенотипическая характеристика клеток РМЖ позволяет прогнозировать исход заболевания и определять чувствительность к различным видам терапии (Стенина М.Б., Фролова М.А., 2011; Holowatyj A.N. et al., 2011). Наличие экспрессии рецепторов к ER и PgR на поверхности опухолевых клеток является показанием к назначению гормональной терапии (Стенина М.Б., Фролова М.А., 2011; Holowatyj A.N. et al., 2011).
Частота встречаемости люминального В типа РМЖ – до 14–18% наблюдений. Данный тип РМЖ обнаруживается в более молодом возрасте, чаще ме-тастазирует в лимфатические узлы, способствует возникновению рецидивов заболевания, в то же время он более чувствителен к цитостатической терапии по сравнению с люминальным А типом РМЖ (Телетаева Г.М., 2010; Cheang M.C. et al., 2009; Holm K. et al., 2010). Следовательно, выявление люминаль-ного А типа РМЖ означает благоприятный прогноз для пациента, а РМЖ лю-минального В типа в 1/3 случаев с наличием экспрессии Her-2/neu и в 2/3 случаях с отсутствием экспрессии Her-2/neu, но с высоким пролиферативным потенциалом опухолевых клеток – это неблагоприятный прогноз (Стенина М.Б., Фролова М.А., 2011; Holowatyj A.N. et al., 2011). Наличие экспрессии на клетках опухоли молочной железы Her-2/neu также ассоциируется с неблагоприятным прогнозом течения РМЖ и необходимостью анти-Her-2/neu-терапии (Стенина М.Б., Фролова М.А., 2011).
Наиболее часто используемым методом исследования РМЖ является химическое индуцирование опухоли, в частности N-метил-N-нитрозомочевиной (МНМ). МНМ – это алкилирующий агент, способный вызывать развитие опухолей (канцерогенез) при его введении в организм лабораторных животных (Lu J. et al., 1998; Liska J. et al., 2000; Yuri T.et al., 2006; Ting A.Y. et al., 2007; Esendagli G. et al., 2009; Thorpe M.P. et al. 2011; Tsubura A. et al., 2011; El-Abd E. et al., 2014). Введение 7,12-диметилбензантрацен (ДМБА) лабораторным животным повышает экспрессию интегрина 6 (CD49f) и активность клеточного цикла, не влияя на количество базальных и люминальных клеток РМЖ (Sharma D. et al., 2011). В то же время введение МНМ ведет к нарушению лю-минального/базального соотношения клеток РМЖ, увеличению экспрессии CD49f и интегрина b1 (CD29). Введение МНМ лабораторным животным приводит также к повышению активности FAK (киназа локальной адгезии) в клетках опухоли, особенно в CD29hi популяции клеток, и снижению экспрессии интегрина b3 (CD61) (Sharma D. et al., 2011).
Следует отметить, что введение МНМ крысам-самкам Sprague-Dawley приводило к развитию опухолей не только в молочной железе, но и в других органах. Морфологически это были опухоли мезенхимальной или эпителиальной природы (фиброаденомы, комбинации тубулярных аденом и фиброаденом, гиперкератические папилломы, кератиновые кисты и опухоли из периферической нервной ткани). По результатам гистологического исследования химически индуцированные опухоли имели морфологическую картину протоко-вой аденокарциномы (Ting A.Y. et al., 2007; Esendagli G. et al., 2009). В работе B.A. Gusterson, J.C. Williams в 1981 г. при химически индуцированной опухоли у крыс-самок макроскопически были выявлены новообразования, произраставшие из области сосков, имеющие солидное строение с четкими границами и хорошим кровоснабжением (Gusterson B.A., Williams J.C., 1981). Гистологически опухоли молочной железы классифицировались как аденокарциномы, которые имели хорошо развитую капсулу с ответвлениями в ткань опухоли, что делило ткань опухоли на дольки. В строме химически индуцированных аденокарцином молочной железы имелось большое количество сосудов, строма опухолей была инфильтрирована мононуклеарными и тучными клетками, гранулы которых определялись диффузно в межклеточном пространстве. Эпителиальный компонент опухолей был организован в аци-нарные структуры, но форма клеток отличалась на различных участках ткани опухоли. Так, в одних участках наблюдалась типичная аденокарцинома с вы-сокодифференцированным эпителием, здесь же имелись участки папиллярного, крибриформного или комедоформного эпителия. Более того, химически индуцированная МНМ опухоль молочной железы у лабораторных животных имела сходство с РМЖ человека – инвазивной протоковой аденокарциномой (Gusterson B.A., Williams J.C., 1981; Allred D.C. et al., 1998; Allred C.D. et al., 2004; Jaafar H.et al., 2009; Pula B. et al., 2013).
Таким образом, МНМ генерирует инвазивную карциному.
Верификация опухоли молочной железы, индуцированной введением N-метил-N-нитрозомочевины
N-метил-N-нитрозомочевина (МНМ) проявляет алкирующее влияние на ДНК и тем самым способствует развитию опухолей, в том числе и опухолей молочных желез, при внутривенном или внутрибрюшинном введении, без необходимости метаболической активации МНМ для проявления мутагенного эффекта (Thorpe M.P. et al., 2011; Pula B. et al., 2013; Jaafar H. et al., 2015). Поскольку в эксперименте МНМ вводили в область молочной железы, то представлялось необходимым изучить морфологические и гистохимические параметры химически индуцированной опухоли молочной железы.
На 6-й неделе после индукции МНМ у 13 из 90 крыс-самок Вистар паль-паторно были выявлены очаги опухолевого роста в молочной железе. На 12-й неделе от начала эксперимента опухоль пальпировалась у 30 из 90 крыс-самок Вистар, на 18-й неделе у 60 из 90 крыс и к 24-й неделе эксперимента опухоль выявлялась у 90 из 90 крыс-самок. В 10 случаях введение МНМ не приводило к развитию опухоли молочной железы у крыс-самок Вистар. Макроскопически у этих животных в молочной железе просматривались фиброзные тяжи с небольшими включениями жировой ткани. В то же время у животных с развившейся опухолью молочной железы вновь сформированная ткань имела вид узла с нечеткими границами, а у некоторых животных – с очагами изъязвления и каль-цификации, прорастания ткани опухоли в кожу и мышцы груди. Гистологический вариант вновь сформировавшейся опухоли молочной железы верифицирован как инфильтративный протоковый рак с предраковыми изменениями в краевых зонах, внутрипротоковой пролиферацией (рис. 5 а, б).
При морфологическом исследовании РМЖ отмечено формирование протоковых, железистых, криброзных структур, выстланных умеренно полиморфным эпителием с вариабельной митотической активностью; преобладание тубулярных структур и наличие отдельных участков опухоли с перемешанными гнездами, цугами и группами отдельных клеток с менее оформленными протоками, вплоть до их полного исчезновения. Фиброзная ткань развита слабо, паренхима преобладает над стромой. В некоторых образцах ткани опухоли молочной железы, индуцированной внутримаммарным введением МНМ, выявлены очаги некроза и кровоизлияний. С учетом выраженности формирования протоков, митотической активности и клеточного полиморфизма выставлена градация в 6 баллов, что соответствует опухоли с умеренной дифференцировкой
Рост опухоли оказывает иммунодепрессивное действие на организм посредством иммунологических механизмов: развития толерантности, вызванное избытком опухолевых антигенов; блокирования эффекторного звена им-мунокомпетентной системы циркулирующими опухолевыми антигенами, антителами и иммунными комплексами антиген-антитело; активации деятельности супрессорных Т-лимфоцитов и макрофагов. Одним из звеньев генерализации неопластического процесса является метастазирование опухолевых клеток в лимфатические узлы. При этом появлению новых метастазов предшествуют нарушения структуры и функции регионарных лимфатических узлов (Коненков В.И. и др., 2012).
При индукции РМЖ через 6, 5 мес отмечается появление опухолевых клеток в лимфатическом сосуде опухолевой ткани (рис. 5в). При исследовании регионарных (аксиллярных) и отдаленных (брыжеечных) лимфатических узлов также определяются метастатические опухолевые клетки в различных зонах лимфатических узлов. Гистологическое исследование показало, что в 100% случаев умеренно дифференцированная аденокарцинома метастазиро-вала в аксиллярные и брыжеечные лимфатические узлы.
Следующим этапом после гистологического изучения было исследование уровня экспрессии рецепторов клеток опухоли к гормонам (эстроген и прогестерон) и эпидермальному фактору роста человека (Her-2/neu). Было показано отсутствие экспрессии эстроген-рецептора в ткани РМЖ, а именно, отсутствие мембранного окрашивания поликлональными антителами E115, взаимодействующими с рецепторами ER (окрашивание клеток в коричневый цвет), баллы = 0 (рис. 6 а).
Показана экспрессия рецептора к прогестерону (PgR) в опухолевой ткани РМЖ, опухолевые клетки прореагировали с кроличьими поликлональными антителами к PgR и имели интенсивный коричневый цвет (Allred D.C. et al., 1998, 2004) – 66% клеток аденокарциномы экспрессируют PgR (рис. 6 б). Балл пропорции общего количества клеток с клетками, прореагировавшими с кроличьими поликлональными антителами, равен 4. Интенсивность окрашивания клеток – средняя, баллы = 2. Общий балл экспрессии PgR равен сумме баллов пропорции и интенсивности окрашивания, то есть равен 6.
Не выявлено экспрессии рецептора Her-2/neu в ткани РМЖ – нет окрашивания в коричневый цвет мембраны клеток аденокарциномы моноклональ-ными антителами SP3, взаимодействующими с рецепторами Her-2/neu, количественная оценка = 0 (рис. 6 в).
Оценка пролиферативной активности клеток аденокарциномы, индуцированной внутримаммарным введением МНМ, выявила наличие экспрессии Ki-67 в 45% случаев – окрашивание опухолевых клеток в коричневый цвет (реакция с моноклональными антителами MIB-5 к Ki-67) (рис. 6 г).
Таким образом, на основании уровня экспрессии гормонов, ростового фактора и интенсивности пролиферативного потенциала клеток аденокарциномы установлен люминальный В тип опухоли молочной железы по соответствию с типами опухолей молочной желез у человека (El-Abd E. et al., 2014).
Морфологический анализ передних средостенных лимфатических узлов при экспериментальном раке молочной железы и различных методах лечения
Морфологический анализ передних средостенных лимфатических узлов у крыс-самок Вистар с РМЖ без лечения. При исследовании передних сре-достенных лимфатических узлов у животных с РМЖ без лечения было выявлено, что площадь сагиттального среза лимфатических узлов увеличивается в 2 раза в сравнении с интактными животными (9,25±0,55 мм2 против 4,59±0,13 мм2).
У крыс с РМЖ без лечения относительный объем коркового вещества средостенных лимфатических узлов уменьшался на 48%, а объем мозгового вещества увеличился на 65% в сравнении с интактными животными (табл. 9).
Уменьшение объема коркового вещества происходило за счет уменьшения объема паракортикальной зоны (на 52%) и лимфоидных узелков со светлыми центрами (на 29%), при этом объем коркового плато и лимфоидных узелков без герминативных центров достоверно не изменялся. Следует отметить почти двукратное увеличение относительного объема мозговых синусов, в то время как объем краевого синуса уменьшался (на 32%).
У интактных животных морфофункциональная организация передних средостенных лимфатических узлов соответствовала промежуточному типу (к/м индекс – 1,29) (рис. 29), у животных с РМЖ без лечения структурно-функциональная организация передних средостенных лимфатических узлов соответствовала фрагментированному типу (к/м индекс – 0,4) (рис. 30).
В сравнении с интактными крысами изменения цитоархитектоники передних средостенных лимфатических узлов у животных с РМЖ без лечения в герминативных центрах увеличено число митотически делящихся клеток в 4,6 раза и ретикулярных клеток в 4,9 раза, макрофагов – в 3,3 раза, имму-нобластов – на 18% и уменьшение количества малых лимфоцитов на 28% (табл. 10).
В паракортикальной зоне переднего средостенного лимфатического узла у животных с РМЖ без лечения было выявлено уменьшение числа иммунобла-стов в 10 раз, средних лимфоцитов – в 3,5 раза и увеличение количества макрофагов в 3 раза, ретикулярных клеток – в 4,3 раза, малых лимфоцитов – на 17%.
В мозговых тяжах обнаружено обилие незрелых плазмацитов, макрофагов и ретикулярных клеток (рис. 31). Установлено увеличение числа незрелых плазматических клеток в 2 раза, макрофагов – в 6 раз и ретикулярных клеток – в 8 раз и снижение числа иммунобластов в 5 раз, средних лимфоцитов – на 33%, зрелых плазматических клеток – на 20%.
В мозговых синусах отмечалось увеличение числа ретикулярных клеток в 4,4 раза, макрофагов – в 2,5 раза, зрелых плазматических клеток на 31%, а также уменьшение числа иммунобластов в 14,5 раз, малых лимфоцитов – на 34%, незрелых плазматических клеток – на 26%, средних лимфоцитов – на 16%.
Морфологический анализ передних средостенных лимфатических узлов у крыс-самок Вистар с РМЖ после курса полихимиотерапии. Площадь среза передних средостенных лимфатических узлов у крыс Вистар с РМЖ после курса ПХТ увеличивалась на 18,5% в сравнении с интактными животными (5,44±0,21 мм2 против 4,59±0,13 мм2). В передних средостенных лимфатических узлах у крыс с РМЖ после курса полихимиотерапии в сравнении с интактными животными относительный объем коркового вещества уменьшался на 42% за счет снижения объема паракортикальной зоны на 46% и герминативных центров – на 37%. Увеличение относительного объема мозгового вещества на 58% происходило за счет увеличения объема мозговых синусов (на 58%) и мозговых тяжей (на 58%). Относительный объем В-зоны увеличивался на 44%. Объем краевого синуса уменьшался на 39% (см. табл. 9).
Структурно-функциональная организация передних средостенных лимфатических узлов у животных с РМЖ после проведения курса полихимиотерапии соответствовала фрагментированному типу (к/м индекс – 0,47) (рис. 32).
Исследование клеточного состава лимфатических узлов у животных с РМЖ после проведения курса ПХТ в сравнении с интактными животными выявило в герминативных центрах обилие макрофагов (рис. 33). Было найдено увеличение числа макрофагов в 3 раза и митотически делящихся клеток в 3,2 раза, уменьшение количества иммунобластов на 22% и малых лимфоцитов – на 17% (см. табл. 10.)
В паракортикальной зоне было обнаружено уменьшение числа ретикулярных клеток в 5 раз, иммунобластов – в 11 раз, макрофагов – на 89%, средних лимфоцитов – в 4,2 раза, увеличение количества малых лимфоцитов на 19%.
В мозговых тяжах было выявлено обилие незрелых и зрелых плазматических клеток, макрофагов и ретикулярных клеток (рис. 34).
Анализ данных показал снижение числа иммунобластов в 8 раз, средних (на 38%) и малых лимфоцитов (на 14%), зрелых плазматических клеток на 29%, рост количества макрофагов в 7,7 раз, ретикулярных клеток – в 9,5 раза и незрелых плазматических клеток – в 2,3 раза в мозговых тяжах.
В мозговых синусах передних средостенных лимфатических узлов у крыс с РМЖ после проведения курса полихимиотерапии отмечалось увеличение числа ретикулярных клеток в 5,7 раза, макрофагов – в 2,6 раза, зрелых плазматических клеток – на 30%, снижение числа иммунобластов – в 16 раз, средних (на 40%) и малых лимфоцитов (на 22%), незрелых плазматических клеток – в 2,2 раза.
В сравнении с аналогичными показателями у крыс с РМЖ без лечения исследование структурных преобразований в передних средостенных лимфатических узлах у животных с РМЖ после проведения курса полихимиотерапии позволило выявить увеличение относительного объема коркового вещества на 12% за счет увеличения объема паракортикальной зоны на 14% и коркового плато – на 17%. Объем мозговых синусов был уменьшен на 18% (см. табл. 9).
При изучении цитоархитектоники передних средостенных лимфатических узлов у животных с РМЖ после проведения курса полихимиотерапии в сравнении с показателями у крыс с РМЖ без лечения было выявлено снижение числа иммунобластов в герминативных центрах на 34%, митотически делящихся клеток – на 31%, средних лимфоцитов – на 13%, макрофагов – на 12%, увеличение количества ретикулярных клеток на 26% и малых лимфоцитов на 14% (см. табл. 10).
В паракортикальной зоне было отмечено уменьшение количества макрофагов на 38% и средних лимфоцитов на 16%, увеличение числа ретикулярных клеток на 16%.
В мозговых тяжах возрастало количество макрофагов на 27%, незрелых плазматических клеток – на 13%, ретикулярных клеток – на 23% и снижалось число иммунобластов на 39%, зрелых плазматических клеток – на 11%.
В мозговых синусах было выявлено увеличение числа ретикулярных клеток на 28%, малых лимфоцитов – на 19% и уменьшение количества средних лимфоцитов на 30%, незрелых плазматических клеток – на 39%.
Морфологический анализ передних средостенных лимфатических узлов у крыс-самок Вистар с РМЖ после оперативного лечения. Площадь среза передних средостенных лимфатических узлов у животных с РМЖ после оперативного лечения в сравнении с интактными животными достоверно не изменялась (4,9±0,39 мм2 против 4,59±0,13 мм2).
В сравнении с интактными крысами в передних средостенных лимфатических узлах у животных с РМЖ после оперативного лечения относительный объем коркового вещества уменьшался на 44% за счет уменьшения объема паракортикальной зоны на 38%. Объем мозгового вещества был увеличен на 40% за счет увеличения объема как мозговых синусов (на 49%), так и мозговых тяжей (на 33%). Относительный объем В-зоны увеличивался на 32% (см. табл. 9). По своей морфофункциональной организации передние средо-стенные лимфатические узлы крыс-самок с РМЖ после оперативного лечения соответствовали фрагментированному типу (к/м индекс – 0,65) (рис. 35). При этом корково-мозговой индекс был увеличен в сравнении как с аналогичными показателями у животных с РМЖ без лечения, так и с РМЖ после проведения курса полихимиотерапии.
Изучение цитоархитектоники структурных компонентов передних сре-достенных лимфатических узлов у животных с РМЖ после проведения оперативного лечения в сравнении с аналогичными показателями у интактных крыс позволило выявить в герминативном центре обилие иммунобластов, средних лимфоцитов, макрофагов и ретикулярных клеток (рис. 36). В герминативных центрах найдено увеличение количества митотически делящихся клеток в 7 раз, ретикулярных клеток – в 5,2 раза, макрофагов – в 2 раза, иммунобластов – на 79%, средних лимфоцитов – на 21% на фоне уменьшения числа малых лимфоцитов на 42% (см. табл. 10).
В паракортикальной зоне обнаруживалось уменьшение числа иммунобла-стов в 21 раз, средних лимфоцитов – в 3,6 раз, увеличение количества ретикулярных клеток в 4,8 раза, макрофагов – на 59% и малых лимфоцитов на 19%.
Корреляционные взаимосвязи параметров цитоархитектоники лимфатических узлов и количества микроРНК
Корреляционные взаимосвязи между параметрами цитоархитекто-ники подмышечных лимфатических узлов I порядка и количеством мик-роРНК. У крыс Вистар с РМЖ без лечения найдена положительная корреляция между количеством микроРНК-21 в сыворотке крови и количеством незрелых плазмоцитов в мозговых тяжах (R=0,45; p=0,043); положительная корреляция между количеством микроРНК-21 в лимфе и количеством тучных клеток в мозговых синусах (R=0,59; p=0,041) и незрелых плазмоцитов в мозговых тяжах (R=0,68; p=0,013), отрицательная корреляция между количеством микроРНК-21 и количеством макрофагов в светлых центрах (R=–0,58; p=0,045) и зрелых плазмоцитов в мозговых тяжах (R=–0,6; p=0,03) (табл. 16).
Найдена положительная корреляция между микроРНК-221 в сыворотке крови и количеством средних лимфоцитов в светлых центрах (R=0,7; p=0,007) и отрицательная – с количеством малых лимфоцитов (R=–0,58; p=0,034) и ретикулярных клеток в светлых центрах (R=–0,6; p=0,028). Установлена положительная корреляция между микроРНК-221 в лимфе и количеством макрофагов в светлых центрах (R=0,8; p=0,002) и паракортикальной зоне (R=0,7; p=0,01), количеством малых лимфоцитов (R=0,6; p=0,038) и зрелых плазмоцитов (R=0,75; p=0,004) в мозговых тяжах и иммунобластов в мозговых синусах (R=0,78; p=0,026); отрицательная корреляция между количеством микроРНК-221 и количеством средних лимфоцитов (R=–0,62; p=0,028) и незрелых плазмоциов (R=–0,77; p=0,003) в мозговых тяжах, количеством зрелых плазмоцитов (R=–0,71; p=0,085) и тучных клеток (R=–0,69; p=0,012) в мозговых синусах.
Найдена положительная корреляция между микроРНК-222 в опухоли и количеством тучных клеток в мозговых синусах (R=0,42; p=0,018) и отрицательная – с количеством макрофагов в мозговых тяжах (R=–0,36; p=0,048) и незрелых плазмоцитов в мозговых синусах (R=–0,62; p=0,0002). Найдена положительная корреляция между микроРНК-222 в сыворотке крови и количеством незрелых плазмоцитов в мозговых тяжах (R=0,58; p=0,037); в лимфе – отрицательная корреляция с количеством средних лимфоцитов в паракорти-кальной зоне (R=–0,7; p=0,01) и мозговых тяжах (R=–0,65; p=0,02).
Установлена положительная корреляция между микроРНК-429 в опухоли и количеством макрофагов в паракортикальной зоне (R=0,38; p=0,035), количеством зрелых плазмоцитов в мозговых тяжах (R=0,51; p=0,003); отрицательная корреляция – с количеством средних лимфоцитов (R=–0,4; p=0,024) и незрелых плазмоцитов (R=–0,49; p=0,005) в мозговых тяжах. МикроРНК-429 в сыворотке крови: положительная корреляция с количеством малых лимфоцитов в светлых центрах (R=0,79; p=0,0001) и мозговых тяжах (R=0,61; p=0,009), зрелых плаз-моцитов в мозговых тяжах (R=0,52; p=0,03); отрицательная корреляция – с количеством средних лимфоцитов (R=–0,55; p=0,02), макрофагов (R=–0,57; p=0,015) и митозов (R=–0,75; p=0,0004) в светлых центрах, средних лимфоцитов в мозговых тяжах (R=–0,49; p=0,043), иммунобластов в мозговых синусах (R=–0,5; p=0,04). МикроРНК-429 в лимфе: положительная корреляция с количеством средних лимфоцитов в мозговых тяжах (R=0,62; p=0,028) и нейтрофи-лов в мозговых синусах (R=0,67; p=0,017); отрицательная корреляция – с количеством средних лимфоцитов в светлых центрах (R=–0,66; p=0,018).
После проведения курса полихимиотерапии найдена положительная корреляция между микроРНК-21 в опухоли и количеством средних лимфоцитов в светлых центрах (R=0,64; p=0,004), зрелых плазмоцитов в мозговых тяжах (R=0,54; p=0,02), ретикулярных клеток в мозговых синусах (R=0,63; p=0,005), отрицательная – с количеством иммунобластов в мозговых тяжах (R=–0,65; p=0,003), средних лимфоцитов (R=–0,6; p=0,007), малых лимфоцитов (R=–0,8; p=0,00006) и незрелых плазмоцитов (R=–0,58; p=0,011) в мозговых синусах; в сыворотке крови – с количеством макрофагов (R=0,56; p=0,023), ретикулярных клеток (R=0,57; p=0,02) и количеством митозов (R=0,6; p=0,013) в мозговых тяжах, отрицательная корреляция – с количеством митозов в светлых центрах (R=–0,6; p=0,012), малых лимфоцитов в паракортикальной зоне (R=–0,57; p=0,019); в лимфе – отрицательная корреляция между микроРНК-21 и количеством незрелых плазмоцитов (R=–0,63; p=0,026) и макрофагов в мозговых тяжах (R=–0,7; p=0,01) (табл. 17).
Найдена положительная корреляция между микроРНК-221 в опухоли и количеством средних лимфоцитов в светлых центрах (R=0,47; p=0,047), ретикулярных клеток в мозговых синусах (R=0,52; p=0,025) и отрицательная – с количеством средних лимфоцитов (R=–0,47; p=0,048) и незрелых плазмоцитов (R=– 0,52; p=0,025) в мозговых синусах; в лимфе – отрицательная корреляция между количеством микроРНК-221 и количеством иммунобластов в мозговых тяжах (R=–0,59; p=0,041).
Найдена положительная корреляция между микроРНК-222 в опухоли и количеством малых лимфоцитов в паркортикальной зоне (R=0,55; p=0,016) и отрицательная – с количеством макрофагов в паракортикальной зоне (R=– 0,46; p=0,049) и незрелых плазмоцитов в мозговых синусах (R=–0,51; p=0,027). Найдена положительная корреляция между микроРНК-222 в сыворотке крови и количеством средних лимфоцитов в мозговых тяжах (R=0,75; p=0,048); в лимфе – положительная корреляция с количеством макрофагов (R=0,83; p=0,001) и отрицательная корреляция с количеством нейтрофилов (R=–0,64; p=0,03) мозговых синусах.
Найдена положительная корреляция между микроРНК-429 в опухоли и количеством средних лимфоцитов в светлых центрах (R=0,48; p=0,043) и отрицательная корреляция – с количеством незрелых плазмоцитов (R=–0,68; p=0,002) в мозговых синусах. В сыворотке крови: положительная корреляция с количеством незрелых плазмоцитов в мозговых синусах (R=0,66; p=0,004) и отрицательная – с количеством средних лимфоцитов в мозговых тяжах (R=–0,62; p=0,0009) и ретикулярных клеток в мозговых синусах синусах (R=–0,86; p=0,0001).
После проведения оперативного лечения найдена положительная корреляция между количеством микроРНК-21 в лимфе и количеством макрофагов в мозговых тяжах (R=0,71; p=0,02) и отрицательная – с количеством малых лимфоцитов (R=–0,81; p=0,078), ретикулярных клеток (R=–0,71; p=0,031) и числом митозов в мозговых тяжах (R=–0,76; p=0,012) (табл. 18).
Установлена положительная корреляция между микроРНК-221 в сыворотке крови и количеством иммунобластов мозговых тяжей (R=0,53; p=0,046); положительная корреляция между количеством микроРНК-221 в лимфе и количеством ретикулярных клеток в светлых центрах (R=0,61; p=0,031).
Найдена положительная корреляция между микроРНК-222 в сыворотке крови и количеством ретикулярных клеток в мозговых тяжах (R=0,52; p=0,046) и отрицательная – с количеством ретикулярных клеток в светлых центрах (R=– 0,66; p=0,006); между микроРНК-222 в лимфе – положительная корреляция с количеством митозов в светлых центрах (R=0,76; p=0,041) и отрицательная – с количеством средних лимфоцитов в паракортикальной зоне (R=–0,59; p=0,039).
Найдена отрицательная корреляция между количеством микроРНК-429 в сыворотке крови и количеством ретикулярных клеток паракортикальной зоны (R=–0,53; p=0,039); положительная корреляция между микроРНК-429 в лимфе и количеством средних лимфоцитов в светлых центрах (R=0,58; p=0,047) и отрицательная – с количеством средних лимфоцитов в паракорти-кальной зоне (R=–0,65; p=0,02).
После проведения оперативного лечения и последующей химиотерапии найдена положительная корреляция между количеством микроРНК-21 в сыворотке крови и количеством ретикулярных клеток в паракортикальной зоне (R=0,64; p=0,005) и зрелыми плазмоцитами в мозговых синусах (R=0,49; p=0,042) и отрицательная – с количеством ретикулярных клеток (R=–0,56; p=0,019) в мозговых синусах; обратная корреляция между микроРНК-21 в лимфе и количеством иммунобластов в светлых центрах (R=–0,71; p=0,029) (табл. 19).